No Slide Title

Cytogenetica
• Visualiseren van de chromosomen
• Chromosomen slechts zichtbaar in delende cellen (in Mfase): T-cellen uit bloed stimuleren in cultuur (vb met
phytohemaglutinine) of foetale cellen
• M-fase is kort (zie figuur), mitotische index
• Mitotische index ↑ spindel blokkeren colcemid
• Andere techniek thymidine beperking, en release =
gesynchroniseerde cycli  optimalisatie  prometafase
 minder condens dan metafase
Cytogenetica
• Vroeger klassificatie van chromosomen op basis van
grootte en positie van centromeer, nummering van lang
naar kort
• Invoeren van banding technieken: sluitende identifactie
van chromosomen en identificatie van posities op
chromosomen
• Verschillende banding technieken, geven info over
structurele organisatie (resolutie 1-10 Mb)
• Karyotype 46XX of 46XY en eventuele abnormaliteiten
• Down-syndroom  trisomie
• G-banden
Banding technieken
• trypsine digestie  Giemsa stain  G-banden donker, bleke banden G
negatief
• Q-banden
• Fluorescente AT-rijke DNA binder (Quinacrine, DAPI, Hoechst 33258)
UV-fluorescentie  Q-banden zelfde als G-banden
• R-banden
• Reverse G-banden  hitte behandeling denatureerd AT-regios voor
Giemsa stain. Zelfde patroon met GC-specifieke kleuren
• T-banden
• Subset van R banden nabij de telomeren, T-banden zijn de meest
intense R-banden  extreme hitte behandeling gevolgd door Giemsa
stain
• C-banden
• Kleuren van de centromeren  denatureren met barium hydroxide
gevolgd door Giemsa stain
Banding-patronen
• De bindingsverschillen die aan de basis van de
banden  verschillen in de scaffold-loop
structuur zie figuur
• Scaffold attachment regios (SARs)
• Meer SARs per lengte eenheid in G banden dan
in R banden  G banden kleinere loops
Karyogram
In situ hybridization
• Chromosoom in situ hybridisatie
• Weefsel in situ hybridizatie
Chromosoom in situ hybridizatie
• Methode om genen en andere DNA sequenties te
“mappen”  gelabelde DNA probe hybridiseren tegen
gedenatureerde chromosomen in situ.
• Metafase of prometafase microscoop slide preparatie
(zie cytogenetica), behandelen met Rnase en proteinase
K  opgezuiverd chromosomaal DNA  denatureren
met formamide  probe
• Voor of na hybridisatie chromosoom banding
• FISH fluorescente label direct of indirect
• Voor goede signaalsterkte lange probe (40kb) 
noodzaak voor “blokken” van repeat sequences door
supressie hybridizatie
Chromosoom in situ hybridizatie
• Detectie met fluorescentie microscoop
• Metafase spreads  dubbele hybridizatie spots
(zuster chromatiden, zie cyclus)
• Resolutie ong. 1 Megabase
Chromosoom in situ hybridizatie
Weefsel in-situ hybridisatie
• In deze procedure wordt een gelabelde probe
gehybridiseerd tegen RNA in weefselsecties
• Hybridizatie mix 50% formamide (lagere hybridisatie
temp)
• Enkel strengige probes  complementaire RNA probes
 antisense riboprobes  gen in reverse orientatie in
cloning vector
• Radioactieve of niet-isotoop labels
• Fluorescentie microscopische detectie
• Commerciele kits verkrijgbaar vb cytomegalovirus,
Epstein-Barr virus
• Zelfde voorzorgen en stappen als bij in-situ PCR
Immunologische technieken
Serologische technieken
• Eigenlijk alle technieken die gebruik maken van
antilichamen  eigenlijk de meeste
immunologische technieken gebruikt in diagnose
• Een selectie van de meest gebruikte technieken
in de medische diagnostiek zal besproken
worden
Bloedgroep bepaling met gel-techniek
Monoclonaal antilichaam voor bloedgroep A antigen gebonden op gelmatrix
Bloedgroep: A RhD neg
Latex agglutinatie
• Polystyreen latex micro-partikels coaten met
virale of andere antigenen
• Mengen met serum van patient
• Indien Ab voor antigen zullen de partikels
zichtbaar agglutineren
• Veel gebruikte techniek: eenvoudig en snel
• Vele commerciele kits: rubella, toxoplasmose,
cytomegolovirus...
Latex agglutinatie
Hemaglutinatie
• Variant van de latex agglutinatie techniek
• Rode bloedcellen zijn de deeltjes
• Bloedgroep bepaling met antigenen reeds
aanwezig op de cellen
• Rode bloedcellen kunnen ook gecoat worden met
andere antigenen (zie THPA test voor syfillis)