Reductie van aspecifieke reacties in immunologische

Stage Immunopathologie IP9
Expressie en karakterisatie van eiwitten in HEK 293 cellen
Omschrijving:
HEK 293 zijn humane cellen waarin, met behulp van moleculaire technieken, DNA van
verschillende eiwitten kan worden getransfecteerd. De cellen kunnen daarna hoge expressie van
de eiwitten geven.
Project:
Het expressiesysteem van HEK 293 cellen is al langere tijd in gebruik binnen Sanquin. Voor dit
project willen we fragmenten van immunoglobulines tot expressie brengen. Deze expressie moet
geoptimaliseerd worden zodat de cellen hoge eiwitprodukties geven. Verschillende isotypen en
specificaties van immunoglobuline fragmenten zullen tot expressie worden gebracht. Na
productie zullen de eiwitten gezuiverd worden en gekarakteriseerd. Het doel is om zo hoog
mogelijke expressie te bereiken van immunoglobuline fragmenten.
Vraagstellingen:
1. Welke immunoglobuline fragmenten komen het best tot expressie in HEK 293 cellen?
2. Welke stappen zijn nodig om de expressie en zuivering van immunoglobulines te
optimaliseren?
Technieken:
Celkweken:
Kweken van HEK293 cellen
(Mogelijk) kweken van E.coli cellen
Moleculaire technieken: transfectie van DNA in Hek293 cellen
Zuiveren DNA uit E.coli met mini- of maxi-prep
Eiwitzuiveringen:
Zuiveren van eiwit op de FPLC met verschillende kolommen
Analyse eiwit:
SDS-PAGE gelen
Meten eiwit concentraties met verschillende technieken
Afdeling: Immopathologie
Praktisch:
Duur: 5-9 maanden
e
Gewenst profiel: HLO student 4 jaars/ eindstage
Contact: Theo Rispens of Henk te Velthuis