Vragen OPen Dag - Studeren in Leiden

Kloneer een gen van interesse.
In fig. 1 zie je een plasmidekaart van de vector pUC19 met een
handige MultiCloningSite (MCS). Probeer het gen “ORFkanR” uit
het plasmide pUC4K (fig.2) te kloneren in de MCS van pUC19.
Na het kloneren wordt het gen tot expressie gebracht in een
bacteriestam. Hier wordt plasmide DNA uit geisoleerd en door
knippen met een restrictie-enzym (RE) gecontroleerd of de
klonering gelukt is.
Vraag A.
Met welke restrictie-enzymen is het mogelijk om het gen te
kloneren? Geef zoveel mogelijk opties.
Vraag B.
Zodra het gen gekloneerd is wordt een controle uitgevoerd of de
klonering gelukt is door te knippen met RE HindIII. Geef voor alle
opties uit vraag A de grootte van de DNA fragmenten.
Vraag C.
Teken het DNA fragementen in naast de molecuulmarker in fig. 3.
Vraag D.
Met het restrictie enzym BspHI knip je pUC4k.
Welke DNA framenten verwacht je?
Geef deze ook aan in fig. 3.
pUC19
Fig.1
BspHI (3762)
NarI (236)
BglI (251)
DraI (3504)
EcoRI (396)
BamHI (405)
SalI (411)
PstI (421)
1
AmpR
BglI (3047)
pUC4K
DraI (2812)
DraI (2793)
BspHI (2754)
mogelijkheden
1 2 3 4 5 6 7 8……
NdeI (184)
BspHI (3867)
3914bp
ORF kanR
271 AA
HindIII (981)
NsiI (991)
NsiI (1257)
ClaI (1410)
XhoI (1501)
BspHI (1581)
PstI (1661)
SalI (1663)
BamHI (1669)
EcoRI (1678)
Fig.2
Fig.3