ce-ivd spec template

MultiMix™
Triple-Colour Reagent
Anti-Human CD8/FITC
Anti-Human CD4/RPE
Anti-Human CD3/APC
Codenr. TC660
Beoogde toepassing
Voor in-vitro-diagnostiek.
TC660 is bestemd voor toepassing bij flowcytometrie. Het reagens is bedoeld voor gebruik bij de identificatie
van subsets van CD8-, CD4- en CD3-positieve T-cellen. CD8 is aanwezig op suppressor-Tlymfocyten/cytotoxische T-lymfocyten en is een nuttige marker voor de beoordeling van de immunologische
status van een patiënt. CD4 komt voor op T-helper/inducer-lymfocyten en een subset van rijpe thymocyten.
CD3 is een pan-T-cel antigeen en een marker voor normale en neoplastische T-cellen. De beoordeling moet
worden uitgevoerd binnen de context van de klinische voorgeschiedenis van de patiënt en van andere
diagnostische onderzoeken uitgevoerd door een bevoegde deskundige.
Bijgeleverd reagens
TC660 bevat de volgende drie overeenkomende fluorescente antilichamen:
Monoclonal Mouse Anti-Human CD8, Clone DK25, geconjugeerd met fluoresceïne-isothiocyanaat-isomeer 1
(FITC).
Monoclonal Mouse Anti-Human CD4, Clone MT310, geconjugeerd met R-fycoerythrine (RPE).
Monoclonal Mouse Anti-Human CD3, Clone UCHT1, geconjugeerd met allofycocyanine (APC).
De drie conjugaten in TC660 zijn geproduceerd uit gezuiverde monoklonale muizenantilichamen van isotype
IgG1, kappa. TC660 wordt geleverd in vloeibare vorm in een buffer met 1% boviene serumalbumine (BSA) en
15 mmol/L NaN3, pH 7,2. Elke flacon bevat 50 tests (20 µl conjugaat voor maximaal 10 6 leukocyten uit normaal
humaan perifeer bloed).
Specificiteit
De specificiteit van Anti-CD8, DK25, is gelijk aan die van de CD8-geclusterde antilichamen OKT8 en Leu-2a
(1).
Anti-CD4, MT310, werd opgenomen in de Second International Workshop and Conference on Human Leucocyte
Differentiation Antigens (tweede internationale workshop en conferentie over humane leukocytendifferentiatieantigenen) en de reactiviteit ervan met CD4 werd bevestigd door onderzoeken uitgevoerd door een aantal
laboratoria (2).
Anti-CD3, UCHT1 werd opgenomen in de First and Third International Workshops and Conferences on Human
Leucocyte Differentiation Antigens (eerste en derde internationale workshop en conferentie over humane
leukocytendifferentiatie-antigenen) en de reactiviteit ervan met CD3 werd bevestigd door onderzoeken
uitgevoerd door een aantal laboratoria (3). Anti-CD3, UCHT1 reageert met de -keten van CD3 (4).
Voorzorgsmaatregelen
1. Voor professionele gebruikers.
2. Dit product bevat natriumazide (NaN3), een chemische stof die in zuivere vorm zeer giftig is.
Bij productconcentraties die echter niet als schadelijk worden geclassificeerd, kan natriumazide reageren met
loden en koperen afvoerbuizen, waardoor zeer explosieve ophopingen van metaalaziden ontstaan. Bij afvoeren
ruim naspoelen met water om ophoping van metaalaziden in de afvoerbuizen te voorkomen.
3. Zoals voor elk product van biologische herkomst geldt, dienen de juiste bewerkingsprocedures te worden
nageleefd.
Opslag
Bewaren in het donker bij 2–8 °C. Niet gebruiken na het verstrijken van de houdbaarheidsdatum zoals
aangegeven op de flacon. Als reagentia worden bewaard onder andere omstandigheden dan gespecificeerd in
de bijsluiter, moeten deze door de gebruiker worden geverifieerd. Er zijn geen duidelijke tekenen die duiden op
instabiliteit van dit product. Daarom moeten positieve en negatieve controles tegelijk met de monsters van
patiënten worden getest. Als onverwachte kleuring wordt waargenomen die niet kan worden verklaard door
variatie in laboratoriumprocedures en een probleem met het antilichaam wordt vermoed, moet men contact
opnemen met onze afdeling technische ondersteuning.
Kleuringsprocedure
1.
Breng 100 µL ontstold (EDTA) bloed over in een 12 mm x 75 mm polystyreen reageerbuis.
2.
Voeg 20 µL TC660 toe en meng voorzichtig op een vortexmixer. De 20 µL is slechts een richtlijn; het
optimale volume moet per laboratorium worden bepaald.
3.
De aanbevolen negatieve controle voor TC660 is Dako codenr. X0978, een FITC-, RPE- en APCgeconjugeerd reagens van hetzelfde isotype als TC660. Voeg 20 µL X0978 toe aan het monster en meng
voorzichtig op een vortexmixer. De 20 µl is slechts een richtlijn; het optimale volume moet per laboratorium
worden bepaald.
4.
Incubeer in het donker bij 4 °C gedurende 30 minuten of bij kamertemperatuur (20–25 °C) gedurende
15–30 minuten.
5.
Voeg 100 µL Dako Uti-Lyse™ (codenummers S3325 of S3350) Reagens A toe aan elk monster en meng
voorzichtig op een vortexmixer. Incubeer 10 minuten bij kamertemperatuur in het donker.
(110567-003)
TC660/NL/TJA/23.08.04 blz. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
6.
Voeg 1 mL Dako Uti-Lyse™ Reagens B toe aan elk monster en meng voorzichtig op een vortexmixer.
Incubeer 10 minuten bij kamertemperatuur in het donker. Als bij stap 5 en 6 een ander lyserend reagens
wordt gebruikt, moeten de aanbevelingen voor dat reagens worden gevolgd.
7.
Centrifugeer gedurende 5 minuten bij 300 x g. Zuig voorzichtig het supernatant af en gooi dit weg, laat
ongeveer 50 µL vloeistof achter.
8.
Voeg 2 mL PBS met 2% boviene serumalbumine toe en resuspendeer de cellen op een vortexmixer.
9.
Herhaal stap 7.
10.
Resuspendeer de pellet in een voor flowcytometrie geschikte vloeistof, bijvoorbeeld 0,3 mL PBS (codenr.
S3024). Als de monsters niet dezelfde dag worden beoordeeld, moet de PBS 1% paraformaldehyde
(fixatief) bevatten.
11.
Beoordeel de monsters op een flowcytometer of bewaar ze tot beoordeling bij 2–8 °C in het donker.
De monsters kunnen tot maximaal 24 uur na lysis worden verwerkt.
De optimale concentraties kunnen variëren afhankelijk van het monster en de bewerkingsmethode, en moeten
in elk laboratorium afzonderlijk worden bepaald. Het verdient aanbeveling met elke run een geschikt positief en
negatief controlemonster mee te nemen ter controle van het reagens en de bewerking. Denk eraan dat
fluorochroom-conjugaten lichtgevoelig zijn en dat de monsters tijdens de kleuringsprocedure en tot de
beoordeling moeten worden afgeschermd van licht.
Bij sommige ziekten kan men verwachten abnormale aantallen cellen aan te treffen die de targetantigenen tot
expressie brengen of afwijkende antigeenspiegels. Dit kan resulteren in een gewijzigd kleuringspatroon. Het is
daarom van belang voor een juiste beoordeling op de hoogte te zijn van het normale expressiepatroon voor de
antigenen en hoe zich dit verhoudt tot de expressie van andere relevante antigenen.
Voor de uitgebreide analyse van neoplastische cellen van leukemie en lymfoom verdienen veelkleurige
reagentia de voorkeur boven eenkleurige analyse. Het juiste gebruik van kleurcompensatie is met name van
belang bij de veelkleurige analyse. Met name de combinatie van FITC, RPE en APC is eenvoudig in gebruik,
aangezien er minimale spectrale overlapping bestaat in de emissiespectra van deze fluorochromen.
Referenties
1.
Miedema F, Terpstra FG, Melief CJM. T cell-dependent immunoglobulin synthesis in the human system.
Studies with T cell-specific monoclonal antibodies. In: Reinherz EL, Haynes BF, Nadler LM, Bernstein ID,
editors. Leukocyte typing II. Proceedings of the 2nd International Workshop on Human Leukocyte
Differentiation Antigens; 1984 Sept 17-20; Boston, USA. New York, Berlin, Heidelberg, Tokyo: SpringerVerlag; 1986. Volume I. p. 213-22.
2.
Stein H, Lennert K, Feller AC, Mason DY. Immunohistological analysis of human lymphoma: correlation of
histological and immunological categories. Adv Cancer Res 1984;42:67-147
3.
McMichael AJ, Gotch FM. T-cell antigens: new and previously defined clusters. In: McMichael AJ, Beverley
PCL, Cobbold S, Crumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, et al., editors. Leucocyte typing III. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 3rd International Workshop and Conference; 1986 Sept 21-26;
Oxford, England. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1987. p.31-62.
4.
Tunnacliffe A, Olsson C, Traunecker A, Krissansen GW, Karjalainen K, de la Hera A. T3.2. The majority of
CD3 epitopes are conferred by the epsilon chain. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt
RE, Stein H, et al., editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th
International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo:
Oxford University Press; 1989. p. 295-6.
Stein H, Lennert K, Feller AC, Mason DY. Immunohistological
analysis of human lymphoma: correlation of histological and immunological categories. Adv Cancer Res
1984;42:67-147.
Verklaring van de symbolen
(110567-003)
Catalogusnummer
Temperatuurlimiet
Houdbaar tot
Medisch hulpmiddel voor
in-vitrodiagnostiek
Buiten het bereik van zonlicht
houden (raadpleeg de
paragraaf Opslag)
Fabrikant
Raadpleeg de
gebruiksaanwijzing
Lotnummer
TC660/NL/TJA/23.08.04 blz. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17