koolhydraat bepalingen 1. benedict reagens 2

KOOLHYDRAAT BEPALINGEN
1. BENEDICT REAGENS
Doel:
Aantonen van reducerende suikers (o.a. glucose, fructose, maltose) in een oplossing.
Benedict reagens
Benedict reagens is een mengsel van natriumcarbonaat, natriumcitraat en kopersulfaat.
Uit de reactie tussen kopersulfaat en natriumcarbonaat onstaat koper(II)oxide.
Koper(II)oxide wordt in de oplossing gehouden door het natriumcitraatcomplex. Onder
invloed van het reducerende vermogen van glucose en warmte, verandert koper(II)oxide
in koper(I)oxide. Koper(I)oxide geeft een donkerrode neerslag.
Zonder glucose vindt deze reactie niet plaats, en blijft de oplossing blauw van kleur.
Methode
Benedictreagens 1L
- Los 173 g natriumcitraat en 100 natriumcarbonaat op in 800 ml gedestilleerd water.
Breng deze oplossing even aan de kook en laat terug afkoelen. Filtreer en voeg
vervolgens nog 50 ml gedestilleerd water toe.
- Los 17,3 g kopersulfaat op in 10 ml gedestilleerd water en voeg deze oplossing
langzaam toe aan de eerste. Voeg gedestilleerd water toe tot je een volume van 1 liter
hebt. Bewaar in een donkere fles.
Gebruik
- Voeg bij 5 ml reagens van Benedict 1,0 ml op glucose te testen monster.
- Meng en verhit 5 minuten in een kokend waterbad.
- Beoordeel direct hierna de kleur en helderheid.
Beoordeling
- Helder blauw = negatief
- Licht troebel = spoor
- Troebel, bruinachtig = positief
- Neerslag, oranjerood = sterk positief
2. BENEDICT REAGENS: AANTONEN GLUCOSECONCENTRATIE
Benedicts kwalitatief reagens kan gebruikt worden om de aanwezigheid van glucose in
urine aan te tonen. Als glucose in de urine voorkomt, dan is dit een aanwijzing voor
diabetes. 5.0 mL van Benedict’s reagens wordt met 0.5 mL urine gemengd en 5 minuten
in een kokend waterbad gezet. De resultaten worden als volgt geïnterpreteerd:
neerslag
glucose
geen neerslag
—
Groen
spoor
Geel
+
Oranje
++
Rood
+++
Biologiepagina.nl
Indien met deze test suiker wordt aangetoond, moet verder onderzoek uitwijzen welke
suiker aanwezig is. Alleen glucose is een indicatie voor diabetes.
Benedicts kwantitatief reagens wordt gebruikt om vast te stellen hoeveel van de
reducerende suiker aanwezig is. Dit reagens vormt een wit neerslag en kan gebruikt
worden in een titratie:
•
•
•
•
•
•
Doe 25.00 mL van Benedicts kwantitatief reagens in een erlenmeyer van 100 mL.
Voeg 6 gram watervrij natriumcarbonaat toe. Je bent er zo verzekerd van dat de
oplossing basisch blijft.
Voeg een paar kooksteentjes toe en verwarm de oplossing tot deze zachtjes
kookt.
Doe het monster in de buret en voeg dit langzaam toe aan de oplossing tot de
blauwe kleur verdwenen is.
Herhaal de bepaling tweemaal, maar laat dan het grootste deel van de oplossing
in een keer in de erlenmeyer lopen. Voeg vervolgens druppelsgewijs toe tot het
equivalentiepunt. Wacht na elke druppel 30 seconden voor de volgende druppel
wordt toegevoegd.
Middel de resultaten.
Om de concentratie van de gebruikte Benedict oplossing vast te stellen moet deze
getitreerd worden met een 1% glucose oplossing.
De concentratie van suiker in het onbekende monster wordt berekend door de volumes
van de onbekende en bekende oplossing met elkaar te vergelijken volgens:
Conbekend = Cbekend * Vbekend / Vonbekend
3. FEHLINGS REAGENS
Doel: aantonen van reducerende suikers met behulp van Fehlings reagens
Felingsreagens bestaat uit twee vloeistoffen: Fehlings A en Fehlings B. Deze twee
vloeistoffen worden vlak voor gebruik met elkaar gemengd.
Fehlings A
Dit is een oplossing van ongeveer 5% koper(II)sulfaat in water.
(1.7 g Kopersulfaat in 25 ml water)
Fehlings B
Dit is een oplossing van kaliumnatriumtartraat, ook wel Seignettezout of Rochellezout
genoemd, en natriumhydroxide in water.
(8.7 g tartraat + 3 g natronloog in 25 ml water)
Van beide vloeistoffen wordt een kleine gelijke hoeveelheid toegevoegd aan de te
onderzoeken stof. Vervolgens wordt het mengsel verwarmd. Indien de te onderzoeken
stof een aldehyde-groep bevat, ontstaat een roodbruin neerslag.
Het principe van de Fehling reactie berust op de reductie van Cu2+ ionen naar
koper(I)oxide volgens:
Biologiepagina.nl
Volgens de literatuur (Kreutzer et al) kan men de kleuren vlak na koken van de oplossing
of na 5 minuten in een kokend waterbad als volgt beoordelen:
helder, blauw
: negatief
licht troebel, groen : licht positief
troebel, geel
: positief
troebel, oranjerood : sterk positief
Bronnen:
http://nl.wikipedia.org/wiki/Benedicts_reagens
http://www.thuisexperimenteren.nl/science/reageerbuisproeven/fehling/fehling.htm
Biologiepagina.nl