Monoclonal Mouse

Monoclonal Mouse
Anti-Vimentin
Kloon Vim 3B4
Codenr. M7020
Beoogd gebruik
Voor diagnostisch gebruik in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Vimentin, kloon Vim 3B4, is bedoeld voor gebruik bij immunocytochemie. De antistof
merkt primaire cellen van mesenchymale oorsprong bij normale en neoplastische weefsels en is nuttig bij
tumordiagnose. Gewoonlijk wordt, bij gebruik van antistof met vimentine, differentiële identificatie geholpen
door de resultaten van een panel antistoffen, vooral antistoffen tegen andere soorten intermediaire filamenten
(1). De resultaten moeten door een bevoegd patholoog worden geïnterpreteerd, rekening houdend met de
anamnese van de patiënt en andere diagnostische tests.
Samenvatting en uitleg
Vimentine is een 55 kDA intermediair filament (IF) proteïne, die deel uitmaakt van het cytoskelet van
gewervelde cellen. Tussen de vijf categorieën* van IF’s behoort vimentine tot categorie III en wordt uitgedrukt in
het celcytoplasma van mesenchymale oorsprong. (2) Als de overheersende IF-proteïne in mesenchymale
cellen, werd aanvankelijk aangenomen dat vimentine een nuttige marker was voor onderscheiding van nietepitheel van epitheelafgeleide neoplasmen. De co-expressie van intermediaire filamenten, vooral vimentine en
cytokeratine, is nu aangetoond bij verscheidene normale cellen/weefsels en bij neoplastische letsels, die het
gebruik noodzakelijk maken van een panel antistoffen bij differentiële tumordiagnose (1).
*Onlangs werd er een bijkomende categorie (i.e. categorie VI) gecreëerd voor nestine (2).
Geleverd reagens
Monoklonale muizen-antilichamen, geleverd in vloeibare vorm, gezuiverd uit kweeksupernatant. In 0,05 mol/L
Tris/HCl, 1% boviene serumalbumine (BSA) en 15 mmol/L NaN3, pH 7,2.
Kloon: Vim 3B4. Isotype: IgG2a, kappa.
Muizen IgG concentratie: Zie etiket op flacon.
Immunogeen
Vimentine geïsoleerd uit boviene ooglens (3).
Specificiteit
SDS-PAGE analyse van immunoprecipitaten gevormd tussen de antistof en 35S-gemerkte proteïnen van
metabolisch gemerkte humane osteogeen sarcoom 4-998 cellen toont reactie met een ~60 kDa polypeptide,
overeenkomend met vimentine. Bovendien werden enkele banden met lager moleculegewicht waargenomen
en zouden kunnen wijzen op degradatieproducten van vimentine (4).
Bij Western blotting van cytoskeletale proteïnen van Xenopus laevis nierepitheelcellen en erytrocyten, merkt de
antistof een band van ~57 kDa overeenkomend met vimentine. Er werd geen merking waargenomen van
andere intermediaire filamenten (3).
De antistof reageert met een epitoop die gelokaliseerd werd met het spiraal 2 gedeelte van het vimentine
staafdomein. Het is gebleken dat deze epitoop een gebied omsluit rond residu 353 van het staafdomein van
muizenvimentine (5).
Zoals door immunocytochemie wordt aangetoond op vriescoupes en ook op formalinegefixeerde weefsels,
vertoont het antilichaam een kruisreactie met het met vimentine overeenkomende eiwit bij mens, kip, koe,
hond, hamster, paard, aap, konijn en Xenopus laevis (3, 5-8).
Voorzorgsmaatregelen
1. Voor professionele gebruikers.
2. Dit product bevat natriumazide (NaN3), een chemische stof die in zuivere vorm uiterst toxisch is. In
productconcentraties zou natriumazide, alhoewel niet geclassificeerd als gevaarlijk, kunnen reageren met loden
en koperen leidingen, waarbij uiterst explosieve metaalazides worden gevormd. Bij verwijdering, spoelen met
grote hoeveelheden water om opstapeling van metaalazides in leidingen te voorkomen.
3. Zoals bij alle producten van biologische oorsprong, moeten de juiste behandelingsprocedures worden
gebruikt.
4. Draag geschikte beschermende kleding om contact met ogen en huid te voorkomen.
5. Ongebruikte oplossing dient te worden verwijderd in overeenstemming met gemeentelijke, provinciale en
landelijke richtlijnen.
Bewaring
Bewaren bij 2-8°C. Niet gebruiken na de op de flacon vermelde houdbaarheidsdatum. Als reagentia worden
bewaard onder andere omstandigheden dan hier vermeld, moet de gebruiker de omstandigheden controleren.
Er zijn geen duidelijk merkbare aanwijzingen voor instabiliteit van dit product. Daarom zouden tegelijk met
patiëntmonsters positieve en negatieve controles moeten worden uitgevoerd. Als u een onverwachte kleuring
vaststelt die niet verklaard kan worden door variaties in laboratoriumprocedures en u een probleem met de
antistof vermoedt, neemt u contact op met onze technische dienst.
Specimenvoorbereiding
Paraffinecoupes: De antistof kan worden gebruikt voor het merken van in paraffine ingebedde en in formaline
gefixeerde weefselcoupes. Voorbehandeling van weefsels met proteïnase K of door warmtebehandeling
geïnduceerd herstel van de epitoop is vereist. Voor door warmtebehandeling geïnduceerd herstel van de
epitoop worden optimale resultaten verkregen met Dako Target Retrieval Solution, hoge pH, codenr. S3308,
Dako Target Retrieval Solution, codenr. S1700, 10 mmol/L citraatbuffer, pH 6,0, of 10 mmol/L Trisbuffer, 1
mmol/L EDTA, pH 9,0. De weefselcoupes zouden tijdens de behandeling of de daaropvolgende
immunocytochemische kleuringprocedure niet mogen uitdrogen.
(104526-003)
M7020/NL/VGA/31.08.05 p. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Vriescoupes en celpreparaten: De antistof kan worden gebruikt voor het merken van met aceton gefixeerde,
vriescoupes (3, 6, 7) .
Kleuringprocedure
Verdunning: Monoclonal Mouse Anti-Vimentin, codenr. M7020, kan worden gebruikt in een verdunning van
1:100-1:200 wanneer het wordt aangebracht op in formaline gefixeerde, in paraffine ingebedde coupes van
kwaadaardige melanomen en met door warmtebehandeling geïnduceerd herstel van de epitoop gedurende 20
minuten in Dako Target Retrieval solution, hoge pH, code No. S3308 en incubatie met de primaire antistof bij
kamertemperatuur gedurende 30 minuten. Optimale omstandigheden zouden kunnen variëren afhankelijk van
specimen en bereidingsmethode en zouden door ieder onafhankelijk laboratorium bepaald moeten worden. De
aanbevolen negatieve controle is Dako Mouse IgG1, codenr. X0943, verdund tot dezelfde concentratie muizenIgG als de primaire antistof. Tenzij de stabiliteit van de verdunde antistof en negatieve controle werd
vastgesteld bij de feitelijke kleuringprocedure, is het aangeraden om deze reagentia onmiddellijk vóór gebruik
te verdunnen of te verdunnen in Dako Antibody Diluent, codenr. S0809. Positieve en negatieve controles
zouden tegelijk met patiëntmonsters moeten lopen.
Visualisatie: LSAB™+/HRP kit, codenr. K0679 en EnVision™+/HRP kits, codenrs. K4004 en K4006, worden
aanbevolen. Voor vriescoupes en celpreparaten vormt de Dako APAAP-kit, codenr. K0670, een goed
alternatief wanneer endogene peroxidasekleuring problemen oplevert. Volg de bij de gekozen visualisatiekit
bijgesloten procedure.
Automatisering: De antistof is zeer geschikt voor immunocytochemische kleuring met geautomatiseerde
apparaten, zoals de Dako Autostainer.
Werkingskarakteristieken
Door de antistof gemerkte cellen vertonen kleuring, beperkt tot het cytoplasma.
Normale weefsels: De antistof merkt sterk fibrocyten, lipocyten, zachte spiercellen, vasculaire endotheelcellen,
perifere zenuwcellen (Schwann-cellen), macrofagen (met inbegrip van Kuppfer-cellen) en myoepitheelcellen
van zweet- en speekselklieren. Met variabele intensiteit en verdeling, kleurt de antistof eveneens folliculaire
cellen van de schildklier, cortex glandulae suprarenalis, distale niertubuli en mesangiale en endotheelcellen van
de renale glomerulus bij pancreatische acinaire cellen (1).
Abnormale weefsels: Van carcinomen merkte de antistof 15/147 adeno-, 5/13 cholangio-, 2/29 hepatocellulaire,
1/6 kleine cellen, 1/7 schubcellen en 3/10 niet-gedifferentieerde. De antistof merkte eveneens 16/18
melanomen, 4/4 meningiomen, 3/8 mesotheliomen en 17/20 sarcomen. Van andere letsels, merkte de antistof
1/10 carcinoïden, 1/2 neuroblastomen, 4/7 paragangliomen, 1/1 pleomorfe adenomen, 3/3 schwannomen en
1/5 thymonen (1).
Referenties
1. Azumi N, Battifora H. The distribution of vimentin and keratin in epithelial and nonepithelial neoplasms. A
comprehensive immunohistochemical study on formalin- and alcohol-fixed tumors. Am J Clin Pathol
1987;88:286-96.
2. Herrmann H, Aebi U. Intermediate filaments and their associates: multi-talented structural elements
specifying cytoarchitecture and cytodynamics. Curr Opin Cell Biol 2000;12:79-90.
3. Herrmann H, Fouquet B, Franke WW. Expression of intermediate filament proteins during development of
Xenopus laevis. I. cDNA clones encoding different forms of vimentin. Development 1989;105:279-98.
4. Stathopoulos E, Naeve GS, Taylor CR, Epstein AL. LN-6: a monoclonal antibody to vimentin expressed in
non-hematopoietic mesenchymal cells and derived tumors and reactive in B5-fixed, paraffin- embedded
tissues. J Histochem Cytochem 1989;37:1363-70.
5. Bohn W, Wiegers W, Beuttenmuller M, Traub P. Species-specific recognition patterns of monoclonal
antibodies directed against vimentin. Exp Cell Res 1992;201:1-7.
6. Olah I, Kendall C, Glick B. Anti-vimentin monoclonal antibody recognizes a cell with dendritic appearance in
the chicken's bursa of Fabricius. Anat Rec 1992;232:121-5.
7. Heid HW, Moll I, Franke WW. Patterns of expression of trichocytic and epithelial cytokeratins in
mammalian tissues. I. Human and bovine hair follicles. Differentiation 1988;37:137-57.
8. Ramos-Vara JA, Beissenherz ME, Miller MA, Johnson GC, Pace LW, Fard A, et al. Retrospective study of
338 canine oral melanomas with clinical, histologic, and immunohistochemical review of 129 cases. Vet
Pathol 2000;37:597-608.
Verklaring van de symbolen
(104526-003)
Catalogusnummer
Temperatuurlimiet
Medisch hulpmiddel voor in
vitro diagnostiek
Lotnummer
Raadpleeg de
gebruiksaanwijzing
Houdbaar tot
Fabrikant
M7020/NL/VGA/31.08.05 p. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17