Moleculair en cellulair leveronderzoek

Moleculair en cellulair leveronderzoek
Leverstamcellen
WAT....
WAAROM?
... is een stamcel?
ƒ Bruikbaar in celregeneratie of reparatie
‐ Bioartificial liver
Stamcellen kunnen door celdeling aanleiding geven tot nieuwe stamcellen of gespecialiseerde cellen. Bijvoorbeeld, bloedstamcellen kunnen zich vernieuwen maar ook aanleiding geven tot rode en witte bloedcellen.
....een adulte stamcel?
Haar
‐ Celtherapie
ƒ Geneesmiddelenindustrie
Darm
ƒ Om het gebruik van laboratoriumdieren te verminderen
Doel:
Verschillende projecten:
ƒ Het ultieme doel is de biologie van leverstamcellen te begrijpen zodat ze kunnen gebruikt worden in celtherapie bij de mens
ƒ Isolatie en karakterisatie van leverstamcellen
ƒ Bepaling van de leverstamcelhabitat (niche)
ƒ Crosstalk tussen de niche en de stamcellen
HOE?
WAAR?
ƒ Verschillende methodes om leverstamcellen te isoleren
ƒ Karakterisering van de cellen in cultuur d.m.v PCR, Western blot, immunohistochemie/fluorescentie
Celoppervlaktemerker
MACS
(Magnetic Activated Cell Sorting)
Functie
Activatiemodel
FACS
(Fluorescence Activated Cell Sorting)
Specifiek
dieet
Normale lever
Canal of Hering
Zieke lever
Leverstamcellen in cultuur
Intralobular Bile Duct
Intraportal Bile Duct
Normale muislever. Cytokeratine‐19 kleuring
2: biliary tree; 3: bile duct; 4: gall bladder
Transplantatie
(hepatocyten, orgaan)
Normale lever
Genetisch
Habitat
Lever‐
stamcellen ?
Dialyse
Geneesmiddelen
Intoxicaties
Hepatitis
Verlies van leverfuncties
Bioartificiële lever
Cirrotische lever
Alcohol
Leverstellaatcellen
WAT?
Leverstellaatcellen
5 – 8 % van totale levercellen
Belangrijkste functie is opslag van vitamine A
Cytoplasmatische uitlopers
Obesitas
WAAROM?
Bij leverbeschadiging worden de stellaatcellen geactiveerd.
Dit proces wordt gekenmerkt door: overproductie van extracellulaire matrix.
Chronische schade leidt tot verstoring van normale leverstructuur en ‐functie.
Doel:
Begrijpen van het activatiemechanisme van stellaatcellen kan op termijn leiden tot de ontwikkeling van nieuwe behandelingen
Vetdruppels
Verschillende projecten:
Epigentische regulatie van stellaatcelactivatie
ƒ Transcriptionele regulatie van leverstellaatcel activatie in pathologische condities
ƒ Rol van adipokines en insuline tijdens stellaatcelactivatie (NAFLD)
ƒ Rol van het cytoskelet tijdens portale hypertensie
WAAR?
HOE?
Verschillende technieken:
•Isolatie van stellaatcellen uit muislever
•Immunocytochemie
•Immunohistochemie
Perfusion
Hepatocyten
1
SC1
.
2
3
Pump
Pronase Collagenase
Stellate cellculture
Sinusoïdale
endotheelcellen
Leverstellaatcellen
Ruimte van Disse
Voor meer info: Prof. L. van Grunsven, CYTO, Gebouw D, gelijkvloers, lokaal 025B
•RNA‐extractie, reverse transcriptie en real‐time PCR
http://cyto.vub.ac.be/
•Eiwit extractie en western blot
[email protected]