validatieproject kwalitatieve analyse

FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
VALIDATIEPLAN – PLAN DE VALIDATION
I-MET-FLVVT-087
Analysemethode
Méthode d’analyse
Bepaling van vitamine E (dl-alfa-tocoferol) in dierenvoeders
Détermination de vitamine E (dl-alpha-tocophérol) dans les aliments pour animaux
®
Techniek
Chromabond
Technique
HPLC
Matrix / matrixgroep
Matrice / Groupe de
matrices
Type validatie
Type de validation
Verantwoordelijke
(Naam en functie)
Responsable
(Nom et fonction)
Dierenvoeders
Aliments pour animaux
Totaal – Totale
Secundair – Secondaire
Mini-validatie – validation minimale
Mieke Vanbrabant
Verantwoordelijke sectie toevoegingsmiddelen
Responsable section additifs
Naam – Nom: Mieke Vanbrabant
Opgesteld door
Functie - Fonction: Verantwoordelijke sectie Handtekeningen - Signatures:
Rédaction par
toevoegingsmiddelen
(get.)
Datum - Date: 2013-07-01
Naam – Nom: Mandy Lekens
Goedgekeurd door
Functie - Fonction: Labomanager
Datum - Date: 2013-07-03
Handtekeningen - Signatures:
(get.)
LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan – Modèle plan de validation v.01 2012-03-15 1/10
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
Stap – Phase 1: Bepaling van het toepassingsgebied – Déterminer le
champs d’application
De methode moet geschikt zijn voor de kwantitatieve bepaling van vitamine E in dierenvoeders
(volledige/aanvullende diervoeders en voormengsels).
Het gehalte aan vitamine E in dierenvoeders bedraagt gewoonlijk 10 tot 20000 mg dl-alfa-tocoferol per kg.
Het werkgebied werd zo opgesteld dat de courante concentraties probleemloos kunnen gemeten worden en
kritische concentraties niet helemaal aan de uitersten van het werkgebied liggen.
Stap – Phase 2: Doel en statuut van de analysemethode – Le but et
status de la méthode d’analyse
Kwantitatieve bevestigingsmethode, interne (in-house) methode gebaseerd op Europese Verordening
2009/152/EG (Bemonsterings- en analysemethoden voor de officiële controle van diervoeders)
Stap – Phase 3: Keuze validatieparameters – Choisir les paramètres à
valider
Voor deze methode worden de volgende prestatiekenmerken bepaald: lineariteit en werkgebied,
rapporteringsgrens, specificiteit en selectiviteit, juistheid en terugvinding, precisie, herhaalbaarheid,
reproduceerbaarheid (intra-) en robuustheid.
Stap – Phase 4: Externe eisen voor validatieparameters – Des exigences
externes pour les paramètres à valider
N.v.t.
Stap – Phase 5: Keuze van de monsters – Le choix d’échantillons
Routinemonsters en ringtestmonsters
LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan – Modèle plan de validation v.01 2012-03-15 2/10
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION
Analysemethode
I-MET-FLVVT-087
Méthode d’analyse
Bepaling van vitamine E (dl-alfa-tocoferol) in dierenvoeders
Détermination de vitamine E (dl-alpha-tocophérol) dans les aliments pour animaux
®
Techniek
Chromabond
Technique
HPLC
Matrix / matrixgroep
Matrice / Groupe de
matrices
Dierenvoeders
Aliments pour animaux
Datum laatste
aanpassing / Date de
2013/07/16
la dernière adaption
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 3/10
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT

SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
Overzicht van de prestatiekenmerken:
o
Zie paragraaf 3

De validatie voldoet aan procedure LAB 00 P180

De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria
hieronder aangegeven voldaan zijn:
o

Zie paragraaf 3.4 en 3.5 (zowel juistheid als precisie bepaald op minstens 1 niveau)
Historiek validatie
Versie
Herziening datum/door
Reden van herziening
Wijzigingen
01
01/1996, J. Phlix
Opsteller initiële versie
Volledige tekst
02
09/2002, J. Versnick
Bepaling reproduceerbaarheid
Toevoeging gegevens
reproduceerbaarheid
02
10/2002, J. Versnick
Bepaling rapporteringsgrens
Toevoeging gegevens
rapporteringsgrens
02
10/2002, J. Versnick
Bepaling lineariteit
Toevoeging gegevens
lineariteit
02
03
04/2009, J. Versnick
07/2013, M. Vanbrabant
Bepaling herhaalbaarheid en
Toevoeging gegevens
reproduceerbaarheid
precisie
Voorbereiding publicatie en toevoegen
Toevoeging validatieplan en
nieuwe data (Juistheid, precisie en
overzicht validatierapport +
meetonzekerheid)
historiek
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 4/10
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION
Analysemethode
I-MET-FLVVT-087
Méthode d’analyse
Bepaling van vitamine E (dl-alfa-tocoferol) in dierenvoeders
Détermination de vitamine E (dl-alpha-tocophérol) dans les aliments pour animaux
®
Techniek
Chromabond
Technique
HPLC
Matrix / matrixgroep
Matrice / Groupe de
matrices
Dierenvoeders
Aliments pour animaux
Type validatie
Totaal – Totale
Type de validation
Secundair – Secondaire
Mini-validatie – validation minimale
Verantwoordelijke (Naam
en functie)
Responsable
(Nom et fonction)
Opgesteld door
Rédaction par
Mieke Vanbrabant
Verantwoordelijke sectie toevoegingsmiddelen
Responsable section additifs
Naam – Nom: Mieke Vanbrabant
Functie
-
Fonction:
Verantwoordelijke
sectie
toevoegingsmiddelen
Handtekeningen - Signatures:
(get.)
Datum - Date: 2013-07-15
Medewerkers
Jos Phlix : verantwoordelijke sectie
(Naam en functie)
Jan Versnick : verantwoordelijke sectie
Collaborateurs
Karen Janssen : laborant
(Nom et fonction)
Johan Vandenbempt : laborant
Jean-Pierre De Lannoy : laborant
Mieke Vanbrabant : verantwoordelijke sectie
Periode van validatie
Start - Début: 01-1996
Période de validation
Einde - Fin: 07-2013
Methode goedgekeurd en
geschikt bevonden door
Naam – Nom: Mandy Lekens
Handtekeningen - Signatures:
Functie - Fonction: Labomanager
(get.)
Méthode approuvée et jugé Datum - Date: nvt
convenable pour la routine
par
Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure
LAB 00 P 180.
Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB
P 00 180.
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 5/10
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
Samenvatting validatiegegevens – Résumé des données de validation
1. Doel en toepassingsgebied
Kwantitatieve
bepaling
van
vitamine
E
in
dierenvoeders
(volledige/aanvullende
diervoeders
en
voormengsels) met behulp van een afgeleide HPLC-methode (2009/152/EG) met SPE-opzuivering.
Het gehalte aan vitamine E in dierenvoeders bedraagt gewoonlijk 10 tot 20000 mg dl-alfa-tocoferol per kg.
Het werkgebied werd zo opgesteld dat de courante concentraties probleemloos kunnen gemeten worden en
kritische concentraties niet helemaal aan de uitersten van het werkgebied liggen.
2. Analysemethode
Zie bijlage.
3. Prestatiekenmerken
Ruwe gegevens: Zie bijlage.
3.1
Lineariteit en werkgebied
Een ijklijn in solvent werd opgesteld op basis van 7 concentratieniveaus (2-4-5-10-20-30-40 µg/ml)
(07/10/2002, J. Versnick). De geschiktheid van het lineair model voor de ijklijn werd bewezen aan de hand
van het statistisch verwerkingsprogramma Statgraphics (Regressie-analyse, Lack-of-fit test). In routine wordt
er gewerkt met een ijklijn op basis van 3 punten (5 – 20 – 40 µg/ml).
Het werkgebied wordt gekozen in functie van de meest voorkomende doseringsgehaltes en ligt tussen 5 en
40 µg/ml met 20 µg/ml als referentiewaarde (verdunning afhankelijk van het verwachte/gemeten gehalte).
Het werkgebied beperkt zich tot 0,25X – 2X met X = concentratie van STD2 (= 20 µg/ml). Er moet voor
gezorgd worden dat de concentratie van het analyt in de monsteroplossing of een verdunning van deze
oplossing binnen de grenzen van dit werkgebied valt.
3.2
Rapporteringsgrens
De rapporteringsgrens werd berekend op basis van een routinemonster met een gehalte van 50 mg/kg
(7058/02) dat 10 en 20 maal verdund werd (respectievelijk tot 5 en 2,5 mg/kg) (21/10/2002, J. Versnick).
Op basis van de bekomen analyseresultaten werd de rapporteringsgrens ingesteld op 3 mg/kg.
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 6/10
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
3.3
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
Specificiteit en selectiviteit
De piekidentificatie gebeurt aan de hand van de retentietijd.
De piekkwantificatie gebeurt aan de hand van de piekoppervlakte.
3.4
Juistheid
Bij herhaalde analyses van een monster moet het resultaat liggen tussen 75 en 125% van het belaste
gehalte.
De juistheid werd bepaald aan de hand van controlekaartgegevens tijdens de periode juli 2010 – december
2012. Er werden geen resultaten bekomen die niet voldeden aan de recovery-aanvaardingscriteria en het
terugvindingspercentage bedraagt 104,9 %, wat voldoet aan de vooropgestelde voorwaarde (15/07/2013, M.
Vanbrabant).
3.5
Precisie
Herhaalbaarheid (%RSDr ) en intralaboratoriumreproduceerbaarheid (%RSDRw)
3.5.1
Voor deze bepaling werd er volgens de validatieprocedure gebruik gemaakt van Excel-template LAB 00 P
180 F 004. De bekomen %RSDr en %RSDRw moeten lager zijn dan of gelijk aan de maximaal toegelaten
waarde volgens de vergelijking van Horwitz (15/07/2013, M. Vanbrabant).
Diervoeder - Laag gehalte (10 - 1000 mg/kg)
3.5.1.1
Monster met verwacht gehalte van 90 mg/kg
FLVVT
Horwitz
%RSDr
2,84
%RSDr max =
5,42
%RSDRw
5,85
%RSDRw max =
8,13
Herhaalbaarheid r (mg/kg)
7,57
Reproduceerbaarheid R (mg/kg)
15,61
Evaluatie:
Voor de matrix dierenvoeder (laag gehalte) is zowel herhaalbaarheid (%RSDr) als intralaboratoriumreproduceerbaarheid (%RSDRw) kleiner dan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van
Horwitz.
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 7/10
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
Diervoeder – ‘Midden’ gehalte (1000 - 5000 mg/kg)
3.5.1.2
Monster met verwacht gehalte van 1000 mg/kg
FLVVT
Horwitz
%RSDr
3,62
%RSDr max =
3,77
%RSDRw
5,47
%RSDRw max =
5,66
Herhaalbaarheid r (mg/kg)
96,22
Reproduceerbaarheid R (mg/kg)
145,41
Evaluatie:
Voor de matrix dierenvoeder (‘midden’ gehalte) is zowel herhaalbaarheid (%RSDr) als intralaboratoriumreproduceerbaarheid (%RSDRw) kleiner dan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van
Horwitz.
Diervoeder - Hoog gehalte (5000 - 20000 mg/kg)
3.5.1.3
Monster met verwacht gehalte van 20000 mg/kg
FLVVT
Horwitz
%RSDr
1,61
%RSDr max =
2,40
%RSDRw
2,02
%RSDRw max =
3,60
Herhaalbaarheid r (mg/kg)
1079,48
Reproduceerbaarheid R (mg/kg)
1353,63
Evaluatie:
Voor de matrix dierenvoeder (hoog gehalte) is zowel herhaalbaarheid (%RSDr) als intralaboratoriumreproduceerbaarheid (%RSDRw) kleiner dan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van
Horwitz.
3.6
Reproduceerbaarheid (Inter)
In 2010-2012 werd 28 maal deelgenomen aan een ringtesten (matrices diervoeder en voormengsel). De zscores lagen 25 maal tussen -2,0 en 2,0, 1 maal tussen -3,0 en 3,0 en 2 maal buiten -3,0 en 3,0. Er wordt
jaarlijks deelgenomen aan meerdere ringtesten op basis van voeders met een uiteenlopende samenstelling
om de betrouwbaarheid van de resultaten te toetsen. Bij afwijkende resultaten wordt er een outlieronderzoek
ingesteld.
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 8/10
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
3.7
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
Robuustheid
Langetermijnsvalidatie wordt uitgevoerd op basis van Shewart-controlekaarten (trendanalyse).
3.8
Meetonzekerheid
De meetonzekerheid van de methode wordt berekend, rekening houdend met de juistheid en precisie.
Op basis van ringtestresultaten en omwille van de gevoeligheid van vitamine E voor omgevingscondities
wordt de meetonzekerheid voor alle niveaus vastgelegd op 20% (22/07/2013, M. Vanbrabant).
Concentratie
Uitgebreide relatieve
(mg/kg)
meetonzekerheid U (%)
Laag
< 1000
20,4
Midden
1000 – 5000
21,0
Hoog
> 5000
18,2
Niveau
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 9/10
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 10/10