validatieproject kwalitatieve analyse

FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
VALIDATIEPLAN – PLAN DE VALIDATION
Analysemethode
Méthode d’analyse
Techniek
Technique
Matrix / matrixgroep
Matrice / Groupe de
matrices
Type validatie
Type de validation
Verantwoordelijke
(Naam en functie)
Responsable
(Nom et fonction)
I-MET-FLVVT-026a
Kwantitatieve bepaling van vitamine B12 (Cyanocobalamine) in levensmiddelen
Détermination quantitative de vitamin B12 (Cyanocobalamin) dans denrées alimentaires
HPLC
Levensmiddelen (Zuigelingenmelk en voedingssupplementen)
Denrées alimentaires (Aliments pour bébé, lait en poudre et suppléments alimentaires)
Totaal – Totale
Secundair – Secondaire
Mini-validatie – validation minimale
Mieke Vanbrabant
Verantwoordelijke sectie toevoegingsmiddelen
Responsable section additifs
Naam – Nom: Mieke Vanbrabant
Opgesteld door
Functie - Fonction: Verantwoordelijke sectie Handtekeningen - Signatures:
Rédaction par
toevoegingsmiddelen
(get.)
Datum - Date: 2011-12-15
Goedgekeurd door
Approuvée par
Naam – Nom: Mandy Lekens
Functie - Fonction: Labomanager
Datum - Date: 2011-12-17
Handtekeningen - Signatures:
(get.)
LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan – Modèle plan de validation v.01 2012-03-15 1/11
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
Stap – Phase 1: Bepaling van het toepassingsgebied – Déterminer le
champs d’application
De methode moet geschikt zijn voor de kwantitatieve bepaling van vitamine B12 in voedingssupplementen
en zuigelingenmelk.
Het gehalte aan vitamine B12 in voedingssupplementen bedraagt gewoonlijk 1 tot 3 µg per dagelijkse dosis,
het gehalte in zuigelingenmelk bedraagt gewoonlijk 1 tot 2 µg/100 g.
Het werkgebied zal zo opgesteld worden dat de courante concentraties voor beide matrices probleemloos
kunnen gemeten worden en kritische concentraties niet helemaal aan de uitersten van het werkgebied
liggen.
Stap – Phase 2: Doel en statuut van de analysemethode – Le but et
status de la méthode d’analyse
Kwantitatieve bevestigingsmethode, afgeleide methode gebaseerd op Easi-Extract®Vitamin B12 protocol
van R-Biopharm (Rhône Ltd.).
Stap – Phase 3: Keuze validatieparameters – Choisir les paramètres à
valider
Voor deze methode worden de volgende prestatiekenmerken bepaald: lineariteit en werkgebied,
bepaalbaarheidsgrens en aantoonbaarheidsgrens, specificiteit en selectiviteit, juistheid en terugvinding,
precisie, herhaalbaarheid, reproduceerbaarheid (intra-) en robuustheid.
Stap – Phase 4: Externe eisen voor validatieparameters – Des exigences
externes pour les paramètres à valider
Nvt.
Stap – Phase 5: Keuze van de monsters – Le choix d’échantillons
In de eerste plaats 2 gecertificeerde referentiematerialen die een grote gelijkenis met praktijkmonsters
vertonen:

Multivitamin/Multielement tablets: NIST Standard Reference Material (SRM) 3280

Infant/Adult Nutritional Formula: NIST Standard Reference Material (SRM) 1849a
In de tweede plaats zal de geschiktheid van de methode ook getest worden op routinemonsters
LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan – Modèle plan de validation v.01 2012-03-15 2/11
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION
I-MET-FLVVT-026a
Analysemethode
Méthode d’analyse
Techniek
Technique
Matrix / matrixgroep
Matrice / Groupe de
matrices
Kwantitatieve bepaling van vitamine B12 (Cyanocobalamine) in levensmiddelen
Détermination quantitative de vitamin B12 (Cyanocobalamin) dans denrées alimentaires
HPLC
Levensmiddelen (Zuigelingenmelk en voedingssupplementen)
Denrées alimentaires (Aliments pour bébé, lait en poudre et suppléments alimentaires)
Datum laatste
aanpassing / Date de
2013/01/30
la dernière adaption
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 3/11
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT

SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
Overzicht van de prestatiekenmerken:
o
Zie paragraaf 3

De validatie voldoet aan procedure LAB 00 P180

De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria
hieronder aangegeven voldaan zijn:
o

Zie paragraaf 3.2 en 3.3 (zowel juistheid als precisie bepaald op minstens 1 niveau)
Historiek validatie
Versie
Herziening door/datum
Reden van herziening
Wijzigingen
01
12/2012, M. Vanbrabant
Opsteller initiële versie
Volledige tekst
01
01/2013, M. Vanbrabant
BELAC audit 12/2012 en
Toevoeging validatieplan en
voorbereiding publicatie (geen versie
overzicht validatierapport +
wijziging)
historiek
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 4/11
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION
I-MET-FLVVT-026a
Analysemethode
Méthode d’analyse
Techniek
Technique
Matrix / matrixgroep
Matrice / Groupe de
matrices
Type validatie
Type de validation
Kwantitatieve bepaling van vitamine B12 (Cyanocobalamine) in levensmiddelen
Détermination quantitative de vitamin B12 (Cyanocobalamin) dans denrées alimentaires
HPLC
Levensmiddelen (Zuigelingenmelk en voedingssupplementen)
Denrées alimentaires (Aliments pour bébé, lait en poudre et suppléments alimentaires)
Totaal – Totale
Secundair – Secondaire
Mini-validatie – validation minimale
Verantwoordelijke (Naam
en functie)
Mieke Vanbrabant
Responsable
Verantwoordelijke sectie toevoegingsmiddelen
(Nom et fonction)
Naam – Nom: Mieke Vanbrabant
Opgesteld door
Functie
-
Fonction:
Rédaction par
toevoegingsmiddelen
Verantwoordelijke
sectie Handtekeningen - Signatures:
(get.)
Datum - Date: 2012-12-06
Medewerkers
(Naam en functie)
Collaborateurs
(Nom et fonction)
Martine Bral: laborant
Annemie Voets: laborant
Nele Maris : laborant
Johan Vandenbempt : laborant
Jean-Pierre De Lannoy : laborant
Periode van validatie
Start - Début: 12-2011
Période de validation
Einde - Fin: 12-2012
Methode goedgekeurd en
geschikt bevonden door
Naam – Nom: Mandy Lekens
Méthode approuvée et jugé Functie - Fonction: Labomanager
convenable pour la routine
Datum - Date: 2012-12-07
Handtekeningen - Signatures:
(get.)
par
Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure
LAB 00 P 180.
Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB
P 00 180.
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 5/11
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
SAMENVATTING VALIDATIEGEGEVENS – RÉSUMÉ DES DONNÉES DE VALIDATION ......................... 7
1
DOEL EN TOEPASSINGSGEBIED........................................................................................................... 7
2
ANALYSEMETHODE EN ANALISTEN..................................................................................................... 7
3
PRESTATIEKENMERKEN ........................................................................................................................ 7
3.1
LINEARITEIT EN WERKGEBIED ................................................................................................................. 7
3.2
PRECISIE............................................................................................................................................... 8
3.2.1
3.3
4
Herhaalbaarheid (%RSDr ) en intralaboratoriumreproduceerbaarheid (%RSDRw) ...................... 8
3.2.1.1
Zuigelingenmelk (NIST SRM 1849a) .................................................................................... 8
3.2.1.2
Voedingssupplementen (NIST SRM 3280) .......................................................................... 8
JUISTHEID ............................................................................................................................................. 8
3.3.1
Zuigelingenmelk ........................................................................................................................... 9
3.3.2
Voedingssupplementen ............................................................................................................... 9
3.4
AANTOONBAARHEIDSGRENS (LOD) EN BEPAALBAARHEIDSGRENS (LOQ) ................................................. 9
3.5
SELECTIVITEIT EN SPECIFICITEIT ........................................................................................................... 10
3.6
REPRODUCEERBAARHEID (INTER)......................................................................................................... 10
3.7
ROBUUSTHEID ..................................................................................................................................... 10
MEETONZEKERHEID ............................................................................................................................. 10
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 6/11
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
Samenvatting validatiegegevens – Résumé des données de validation
1
Doel en toepassingsgebied
Kwantitatieve bepaling van vitamine B12 in specifieke voedingsmiddelen met behulp van een afgeleide
HPLC-methode (R-Biopharm).
Het gehalte aan vitamine B12 in voedingssupplementen bedraagt gewoonlijk 1 tot 3 µg per dagelijkse dosis,
het gehalte in zuigelingenmelk bedraagt gewoonlijk 1 tot 2 µg/100 g.
2
Analysemethode en analisten
I-MET-FLVVT-026a, versie 01 en 02.
Het validatieonderzoek werd uitgevoerd onder toezicht van sectieverantwoordelijke Mieke Vanbrabant
(2011-2012) door de volgende analisten:





Martine Bral
Annemie Voets
Nele Maris
Johan Vandenbempt
Jean-Pierre De Lannoy
Alle bepalingen gebeurden op HPLC keten 3.
3
Prestatiekenmerken
Ruwe gegevens: Zie bijlage.
3.1
Lineariteit en werkgebied
Een ijklijn in solvent en een ijklijn in matrix werden opgesteld op basis van 5 concentratieniveaus (3 maal).
De geschiktheid van het lineair model voor beide ijklijnen werd bewezen aan de hand van het statistisch
verwerkingsprogramma Statgraphics (Regressie-analyse, Lack-of-fit test). Een Statgraphics vergelijking
tussen de ijklijn in solvent en de ijklijn in matrix werd uitgevoerd om aan te tonen dat er geen significant
verschil bestaat tussen de ijklijn in solvent en de ijklijn in matrix (Comparison of regression lines). In dit geval
wordt er bijgevolg verder gewerkt met een ijklijn in solvent.
Het werkgebied wordt gekozen in functie van de meest voorkomende doseringsgehaltes en ligt tussen 0,005
en 4 mg/kg.
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 7/11
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
3.2
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
Precisie
3.2.1
Herhaalbaarheid (%RSDr ) en intralaboratoriumreproduceerbaarheid (%RSDRw)
Voor deze bepaling werd er volgens de validatieprocedure gebruik gemaakt van Excel-template LAB 00 P
180 F 004. (Zie bijlage)
De bekomen %RSDr en %RSDRw moeten lager zijn dan of gelijk aan de maximaal toegelaten waarde
volgens de vergelijking van Horwitz.
3.2.1.1
Zuigelingenmelk (NIST SRM 1849a)
FLVVT
Horwitz
%RSDr
4,14
%RSDr max =
16,74
%RSDRw
7,53
%RSDRw max =
25,12
Herhaalbaarheid r (µg/kg)
5,61
Reproduceerbaarheid R (µg/kg)
10,21
Evaluatie:
Voor
de
matrix
zuigelingenmelk
is
zowel
herhaalbaarheid
(%RSD r)
als
intralaboratorium-
reproduceerbaarheid (%RSDRw) kleiner dan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van
Horwitz.
3.2.1.2
Voedingssupplementen (NIST SRM 3280)
FLVVT
Horwitz
%RSDr
3,24
%RSDr max =
8,42
%RSDRw
3,61
%RSDRw max =
12,64
Herhaalbaarheid r (mg/kg)
0,45
Reproduceerbaarheid R (mg/kg)
0,50
Evaluatie:
Voor de matrix voedingssupplementen is zowel herhaalbaarheid (%RSD r ) als intralaboratoriumreproduceerbaarheid (%RSDRw) kleiner dan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van
Horwitz.
3.3
Juistheid
Bij herhaalde analyses van een monster moet het resultaat liggen tussen 80 en 110% van het belaste of
gecertificeerde gehalte.
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 8/11
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
3.3.1
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
Zuigelingenmelk
De juistheid werd bepaald aan de hand van een standaard referentiemateriaal (SRM 1849a) en een
routinemonster en bedraagt 103,33% voor het routinemonster (11490404) en 99,58 % voor SRM 1849a. Dit
voldoet aan de vooropgestelde voorwaarde.
3.3.2
Voedingssupplementen
De juistheid werd bepaald aan de hand van controlekaartgegevens en aan de hand van een standaard
referentiemateriaal (SRM 3280). Voor controlekaartmetingen tijdens de periode januari 2012 – augustus
2012 werden geen afwijkingen vastgesteld en bedraagt het terugvindingspercentage 99,08 %. Voor het SRM
bedraagt het percentage 102,70%. Beide voldoen aan de vooropgestelde voorwaarde.
3.4
Aantoonbaarheidsgrens (LOD) en bepaalbaarheidsgrens (LOQ)
De LOD en LOQ worden berekend op basis van de signaal-ruisverhouding (S/N). Voor de LOD dient S/N ≥ 3
te zijn; voor de LOQ is S/N ≥ 6.
Voor de bepaling van de LOD en LOQ werden 6 deelmonsters met een gehalte van 0,006 mg/kg
geanalyseerd. De signaal/ruis-verhouding (S/N) bedroeg gemiddeld 8,2 en de concentratie bedroeg
gemiddeld 0,006586 mg/kg.
Concentratie Concentratie
(mg/kg)
(mg/kg)
S/N = 3
S/N = 6
0,002011
0,004022
Resultaat
(mg/kg)
S/N
05/01/2012
0,006704
10
06/01/2012
0,007023 11,8
0,001786
0,003571
06/01/2012
0,007962
8,7
0,002746
0,005491
13/01/2012
0,005914
7
0,002535
0,005069
13/01/2012
0,005564
6
0,002782
0,005564
13/01/2012
0,006351
5,5
0,003464
0,006928
Gemiddelde
0,006586
0,002554
0,005108
Datum
8,2
Het gehalte dat overeen zou komen met een S/N = 3 bedraagt 0,002554 mg/kg, bijgevolg wordt de
aantoonbaarheidsgrens vastgesteld op 0,0025 mg/kg.
Het gehalte dat overeen zou komen met een S/N = 6 bedraagt 0,005108 mg/kg, bijgevolg wordt de
bepaalbaarheidsgrens vastgesteld op 0,005 mg/kg.
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 9/11
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
Aangezien 0,008 mg/kg binnen het werkgebied valt, het chromatogram voldoet aan de S/N-verhouding en
we vooral werken naar de doseringsgehaltes in zuigelingenmelk en voedingssupplementen, wordt dit
gehalte aangenomen als bepaalbaarheidsgrens.
3.5
Selectiviteit en specificiteit
De piekidentificatie gebeurt aan de hand van specifieke DAD-spectra en de retentietijd.
De piekkwantificatie gebeurt aan de hand van de piekoppervlakte.
3.6
Reproduceerbaarheid (Inter)
In 2012 werd 1 maal deelgenomen aan een ringtest (matrix ‘Powdered baby food’). De z-score bedroeg 2,1
en de zèta score 1,8 (monsternummer 12120352). Aangezien slechts 64% van de deelnemende laboratoria
een score bekwamen tussen -2 en 2 en de spreiding van de resultaten relatief hoog was, wordt er voorlopig
geopteerd om te blijven deelnemen aan ringtesten terwijl er intern een tweedelijnscontrole wordt uitgevoerd.
3.7
Robuustheid
Langetermijnsvalidatie zal uitgevoerd worden op basis van Shewart-controlekaarten (trendanalyse).
4
Meetonzekerheid
De meetonzekerheid van de methode wordt berekend, rekening houdend met de juistheid en precisie.
Concentratie
Uitgebreide relatieve
(mg/kg)
meetonzekerheid U (%)
Laag
0,015
23,7
Midden
0,05
21,8
Hoog
5
13,6
Niveau
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 10/11
FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE
LABO: FLVVT
SECTIE - SECTION: Toevoegingsmiddelen
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport – Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 11/11