Onderzoek 15: Aantonen van bloed met twee verschillende testen 1. Onderzoeksvraag Welke verdachte heeft bloedsporen op zijn lichaam? 2. Voorbereiding a. Materiaal + stoffen Stoffen: Lumonoltest: - Sproeiflesje - luminol - natriumhydroxide - Bloed of nepbloed (FeCl3) - 3% waterstofperoxide oplossing Kasle-meyertest: - ethanol - fenolftaleïne 0,05 % - waterstofperoxide 3% Materiaal: - druppeltellerflesje; - sproeiflesje - handschoenen - veiligheidsbril - maatbeker - erlenmeyer (100 ml) - glazen trechter - thermometer a. Bereiding oplossingen - Luminoloplossing: Los 0.18g NaOH (of KOH) op in een kleine hoeveelheid water. Voeg 0.1 g luminol (VWR A2185.0010) toe, los op en vul aan tot 100 ml met water. 3% waterstofperoxide oplossing Zakdoekje met weggewassen bloed b. Opstelling (foto) CSI- en forensisch onderzoek Website: www.chemieleerkracht.be Mail: [email protected] c. Veiligheid i. Etiketten ii. H/P zinnen Waterstofperoxide: H EUH210: veiligheidsinformatieblad op verzoek verkrijgbaar. Luminol: geen H- en P-zinnen Ethanol: H225 Licht ontvlambare vloeistof en damp. P210: Verwijderd houden van warmte/vonken/open vuur/hete oppervlakken. — Niet roken. Fenolftaleine 0,1%: H 350-341-361f:Kan kanker veroorzaken. Verdacht van het veroorzaken van genetische schade. Kan mogelijks de vruchtbaarheid schaden. CSI- en forensisch onderzoek Website: www.chemieleerkracht.be Mail: [email protected] P201-281-308+313: Alvorens te gebruiken de speciale aanwijzingen raadplegen. De nodige persoonlijke beschermingsuitrusting gebruiken. Na (mogelijke) blootstelling: een arts iii. WGK code Luminol: 3 zeer vervuilend Ethanol: 1 licht vervuilend (mag door de gootsteen). Waterstofperoxide 3%: 1 licht vervuilend (mag door de gootsteen). Fenolftaleïne 2%: 2 vervuilend iv. COS brochure Luminol: Waterstofperoxide: Ethylacohol: Fenolftaleine 2%: CSI- en forensisch onderzoek Website: www.chemieleerkracht.be Mail: [email protected] 3. Uitvoeren a. Werkwijze Luminol test Ga in de donkere ruimte staan. Probeer de luminoloplossing en de waterstofperoxide-oplossing tegelijk in de erlenmeyer te gieten omdat deze vers bereid moet zijn. Doe het vervolgens in een spuitflesje. Spuit over de bloedvlek een kleine hoeveelheid luminoloplossing. Voeg vervolgens 1 tot 2 druppels 3% waterstofperoxide toe Indien er een blauwe fluorescerend kleur optreedt, is de test positief en zijn er effectief bloedvlekken aanwezig op de t-shirt. Kasle-Meyer test Doe een druppel bloed op een wattenstaafje of filtreerpapier. Doe er vervolgens 1 druppel ethanol op, 1 druppel fenolftaleïne en 1 druppel waterstofperoxide. Indien de vlek roze verkleurt, is de test positief. b. Waarneming (+ foto’s) Luminoltest Er treedt een blauwe fluorescerende kleur op in donkere ruimte, de test geeft een positief resultaat. Kasle-meyer test De bloedvlek verkleurt roze, de test geeft een positief resultaat. Indien er geen verkleuring optreedt, is de test negatief. CSI- en forensisch onderzoek Website: www.chemieleerkracht.be Mail: [email protected] 4. Reflecteren a. Optredende reacties Luminoltest Kasle-Meyertest Fe2+ + fenolftaleïne (kleurloos) + H2O2 → fenolftaleïne (roze) + H2O + Fe3+ b. Besluit Luminoltest: Indien er een onmiddellijke kleurverandering optreedt, wijst dit op een positief resultaat. Het ijzer van de hemoglobine (een zuurstofdragende en ijzerhoudende eiwit in rode bloedcellen) in het bloed als katalysator voor de chemoluminescentie reactie die veroorzaakt luminol te gloeien, waardoor een blauwe gloed wordt geproduceerd wanneer de oplossing op het bloed wordt gespoten. Er is slechts een kleine hoeveelheid ijzer nodig om de reactie te katalyseren. De blauwe CSI- en forensisch onderzoek Website: www.chemieleerkracht.be Mail: [email protected] gloed duurt ongeveer 30 seconden voordat het verdwijnt, hierdoor heb je de tijd om het op foto vast te leggen. Kasle-Meyertest: In de rode bloedcellen is ijzer (aanwezig in hemoglobine). Dit bevordert de oxidatie van fenolftaleïne. De combinatie van bloed en waterstofperoxide doet fenolftaleïne roze kleuren. c. Bronnen i. Literatuur http://www.vakkenweb.nl/vak/nlt/html/opdr_nlt_h4forenscs05bloed.htm ii. Film Luminoltest: https://www.youtube.com/watch?v=u73H-5-RP5Y Kasle-Meyer test: https://www.youtube.com/watch?v=sF0Z0jJGwX8 5. Tips and tricks a. Opmerkingen bij uitvoeren van proef Luminoltest: Het kan zijn dat je bij het vorige proefje bij één of meerdere kledingstukken dacht dat je met een bloedvlek te maken had. Helaas blijkt luminol geen selectief reagens te zijn. Luminol reageert dus met meerdere stoffen waarbij dezelfde waarnemingen kunnen worden gedaan. Zo wordt éénzelfde reactie bewerkstelligd door - micro-organismen (denk hierbij aan schimmels en bacteriën) - joodionen en chloorionen, bijvoorbeeld in schoonmaakmiddelen formalineoplossing (ook wel 'sterk water' genoemd) peroxidasen in planten zoals vooral voorkomen in citrusvruchten, bananen, watermeloenen en talloze groentesoorten een groot aantal verfsoorten. 6. Werkblad Noteer je waarnemingen in onderstaande tabel. Kasle-Meyertest Luminoltest CSI- en forensisch onderzoek Website: www.chemieleerkracht.be Mail: [email protected] Positief resultaat Negatief resultaat 7. Verdachten Jeroen Geert CSI- en forensisch onderzoek Website: www.chemieleerkracht.be Mail: [email protected]