Conventionele transgenese

Impact des polyphénols sur des
marqueurs physiologiques et
biochimiques du vieillissement
intestinal
Tineke Vanhalewyn
Inhoud

Literatuurstudie

Dunne darm + ouderdom
 Polyfenolen

Experimenteel gedeelte + resultaten

Proefdieren
 Morfologie: transmissie elektronenmicroscopie
 Enzymatische activiteitsbepaling

Conclusie
Literatuurstudie: Dunne darm

Bij ouderdom:
Verkorting villi en verkleining enterocyten  kleiner
contactoppervlak  minder absorptie
 Vermindering activiteit enzymen  vermindering
absorptie
 Effect van polyfenolen nog niet onderzocht

Literatuurstudie: Polyfenolen,
meerbepaald flavonoïden

Aromatische kern met OH –en andere
groepen
HO

OH
Voorbeeld is flavonoïde, aanwezig o.a. in
druiven
O
O

Antioxidant effect, positief effect op hart –
en vaatziekten en anticarcinogeen effect
Experimenteel: Proefdieren
1 maand toedienen van polyfenolen aan
jonge (2 maanden) en oude (21 maanden)
ratten
 Dissectie van ratten


Dunne darm is belangrijkste
 Duodenum, jejunum en ileum
 1 cm van jejunum voor microscopie
 Slijm voor enzymatische activiteitsbepaling
Experimenteel: morfologie:
transmissie elektronenmicroscopie
1 cm van jejunum opensnijden
 Op kurk met binnenkant dunne darm naar
boven
 Voorbehandeling: fixeren, spoelen,
dehydrateren
 In ander labo: microcoupes snijden en
kleuren
 Beelden microvilli bekijken en selecteren
 Meten van microvilli

Resultaten: morfologie
1)
3)
2)
1)
2)
3)
Jong zonder PE
Oud zonder PE
Oud met PE
Microvilli verkorten met ouderdom, maar PE
weerhoduen deze verkorting
Experimenteel: Enzymatische
activiteitsbepaling
Alkaline fosfatase, aminopeptidase-N, maltase
en sucrase
 Slijm uit dunne darm door schrapen
 Oplossen in buffer, sonificeren en verdunnen
 M.b.v. kit worden de stalen gekleurd en wordt
absorbantie gemeten met spectrofotometer

Experimenteel: Enzymatische
activiteitsbepaling
 Alkaline
fosfatase: PNPP
Alkaline fosfatase
PNP (geel)
MgCl2
H2PO4
 Aminopeptidase-N: L-leucyl-p-nitroanilide
p-nitroaniline (geel)

Maltase of sucrase: maltose of sucrose
Glucose + O2
Glucose oxidase
H2O2 + chromogène réduit
M.b.v.
Leucine aminopeptidase-N
Maltase of sucrase
glucose
acide gluconique + H2O2
Peroxidase
chromogène oxydé + H2O
formule wordt activiteit berekend
Resultaten: enzymatische
activiteitsbepaling
 Alkaline
fosfatase
Duodenum: daling activiteit met ouderdom, stimulatie
activiteit enzymen werkt niet bij de oude ratten
Jejunum: daling activiteit met ouderdom, wel
stimulatie activiteit enzymen door PE
Resultaten: enzymatische
activiteitsbepaling
D = duodenum, J = jejunum en I = ileum
Enzyme
Alkaline fosfatase
Effect
Effect PE
ouderdom
↓D ↓J =I Stimulatie in jejunum
Aminopeptidase-N ↑D ↓J =I Stimulatie in jejunum
Maltase
↑D ↑J ↑I
Sucrase
↑D ↑J =I Stimulatie in jejunum
Stimulatie in ileum
Conclusie en toekomstbeeld
PE positief effect op morfologie, groter
contactoppervlak en betere absorptie
 PE meestal stimulatie activiteit enzymen in
jejunum, bij maltase stimulatie in ileum
 Nog onderzoek nodig naar polyfenolen ter
bevestiging

Caroline Laurent
 Kaat Van Oostveldt
 Marie Szutrak
 Bart Quartier
 Nicole Kellner
