Tentamen MG2– Voorbeeld Beantwoord de vragen kort en bondig. De getallen tussen haakjes geven de relatieve waarden van de vragen aan. 1, a. (13) b. c. d. Welke rol spelen DNA polymerase, helicase en ligase in het proces van DNA replicatie? Synthese van de nieuwe DNA streng, openen/ontwinden van het dsDNA, aan elkaar vastmaken van de Okazaki fragmenten. Verklaar waarom verdubbeling van de ene streng van het DNA continu verloopt, en die van de andere ("lagging") streng discontinu. DNA Polymerase werkt in 1 richting,van 5’naar 3’. Welke bijzondere eigenschap heeft het DNA polymerase dat in de PCR methode wordt gebruikt? Hitte stabiel De snelheid waarmee DNA polymerase het DNA repliceert is lager in eukaryoten dan in prokaryoten. Wat veroorzaakt dit verschil in snelheid? De aanwezigheid van een chromatine structuur :het DNA is ingepakt in histonen 2. (5) 3. a. (8) b. 4. (6) Wat is transformatie en in welk experiment werd dit voor het eerst waargenomen?Opname van DNA uit het milieu. Door Griffiths in het experiment met de kapselloze bacterien die weer pathogeen werden en kapsel kregen door aanwezigheid van een celextract van bacterien met een kapsel 5. (6) Wat is conjugatie en in welk experiment werd dit voor het eerst waargenomen? Overdracht via cel-cel contact dmv een sex-pilus. Experiment van Lederberg. Hoe kon worden uitgesloten dat de waargenomen uitwisseling van genetische informatie het gevolg was van transductie? Door gebruik te maken van een Ubuis met een filter. 6. 7. (8) a. (6) b. 8. (6) De insertie of deletie van 1 of 2 baseparen in de coderende regio van een gen leidt tot een "frameshift". Wat betekent dit voor het genprodukt (eiwit) dat gecodeerd wordt door dit gemuteerde gen? Alle codons zijn uit fase:er wordt een heel ander eiwit afgelezen. Noem drie processen die in de cel kunnen leiden tot "spontane" mutatie. Replicatie,transpositie en ademhaling Hoe worden fouten, die gemaakt worden tijdens replicatie, hersteld? Proofreading van DNA polymerase en mismatch repair Verklaar waarom prokaryoten in tegenstelling tot eukaryoten gebruik kunnen maken van polycistronische mRNAs (d.w.z. mRNAs die coderen voor meerdere eiwitten). Doordat ze gebruik maken van een Shine & Dalgarno sequentie (ook wel ribosoom binding site genoemd) voor de herkenning van het AUG startcodon. Een rijp (monocistronisch) mRNA molecuul van een bacterie bestaat uit 1500 nucleotiden. Hoe groot schat je bij benadering het molecuulgewicht in kilodalton (kDa) van het eiwit dat door ribosomen in de cel van dit mRNA vertaald wordt? Gegeven is dat het gemiddeld molecuulgewicht van een aminozuur 110 dalton bedraagt. Geeft een toelichting op je antwoord. 1500/3 =500 aminozuren 500 maal 110 dalton= 55000 dalton= 55 kilodalton De transcriptie van de trp-genen, die zorgen voor de biosynthese van het aminozuur tryptofaan in de bacterie E.coli staan onder controle van een Verspreiden niet toegestaan | Gedownload door: Dorus Leliveld | E-mail adres: [email protected] regulator-eiwit dat reageert op de hoeveelheid van het eindprodukt, tryptofaan, in de cel. Hoe noemen we dit eindproduct: a)repressor b) inducer c) co-repressor d) operator co-repressor Het regulator eiwit voorkomt transcriptie door binding aan het DNA. Wanneer bindt het eiwit aan het DNA: a) in afwezigheid van tryptofaan b) in aanwezigheid van tryptofaan in aanwezigheid van trp 9. (6) Het restrictie enzym HaeIII herkent de sequentie GGCC. Hoe vaak zal dit enzym gemiddeld in dubbelstrengs DNA knippen, m.a.w. hoe groot is gemiddeld de afstand tussen twee HaeIII knipplaatsen? Voor GGCC ¼ maal ¼ maal ¼ maal ¼=1/256 ,dus om de 256 bp. 10. (8) In zoektochten naar nog onbekende genen in eukaryotische genomen wordt vaak gebruik gemaakt van cDNA in plaats van genomisch DNA. a) Welk type vector zou je gebruiken voor het maken van een DNA bibliotheek en waarom? Expressievector b) Wat is cDNA? Een DNA copie van mRNA c) Welke extra zoekmogelijkheden geeft een DNA bibliotheek op basis van cDNA in vergelijking met een op basis van genomisch DNA? Je kan zoeken naar de aanwezigheid van het eiwit mbv antilichamen Verspreiden niet toegestaan | Gedownload door: Dorus Leliveld | E-mail adres: [email protected]