hpv genotypering

ACTIVITEITENCENTRUM
MOLECULAIRE DIAGNOSTIEK
LABA-AL041-AN56
M01
HPV GENOTYPERING
INHOUD







Indicaties
Kostprijs en terugbetalingsmodaliteiten.
Uitvoerfrequentie.
Kwaliteitscontrole
Beproevingsmethode
Interpretatie resultaat
Referenties
INDICATIES
Typering van het aanwezige humaan papillomavirus DNA in
- een HPV mRNA of HPV DNA positieve cervixcytologie (PreservCyt medium)
- een HPV DNA positief biopt
KOSTPRIJS EN TERUGBETALINGSMODALITEITEN
Zie labogids:



Voorwaarden voor RIZIV terugbetaling
RIZIV Nomenclatuurnummer
‘Extra - per formulier en aanvraag’ (diagnoseregels/prijs)
UITVOERINGSFREQUENTIE
Zie labogids: items ‘uitvoerfrequentie’ en ‘antwoordtijd’


stalen dienen uiterlijk, op de dag van uitvoering van de test, s’morgens om 8.00u in het
laboratorium beschikbaar te zijn
resultaten zijn 2 dagen na de dag van uitvoering van de test beschikbaar voor 17.00 uur.
KWALITEITSCONTROLE
Staalsoorten (niet onder accreditatie):
 Cervixcytologisch staal in PreservCyt medium
 Biopt
Bij elke LiPA-strip wordt gecontroleerd op de aanwezigheid van de conjugaat controle-lijn. Deze
bevestigt het correct uitvoeren van de LiPA-analyse
Op elke LiPA-strip is er een ook een controle-lijn voor de aanwezigheid van humaan DNA en 2 controlelijnen voor de aanwezigheid van HPV-DNA. Deze laatste 2 controlelijnen detecteren samen alle HPV
genotypes, ook de genotypes waarvoor geen specifieke lijn aanwezig is op de strip en waarvoor het
exact genotype niet kan bepaald worden via deze analyse
CEMOL/LabA
Toepassingsdatum zie metadata MuzliDoc
1/3
ACTIVITEITENCENTRUM
MOLECULAIRE DIAGNOSTIEK
LABA-AL041-AN56
M01
Het aflezen en interpreteren van het LiPA-patroon gebeurt door 2 verschillende analisten, onafhankelijk
van elkaar.
Jaarlijks wordt deelgenomen aan een tweede- of derdelijnscontrole (externe kwaliteitscontrole). De
resultaten van deze controles kunnen worden opgevraagd..
BEPROEVINGSMETHODE
Inno-LiPA HPV Genotyping Extra II (Fujirebio)
Voorafgaand aan de genotypering wordt een DNA-extractie uitgevoerd
 Cervixcytologisch staal in PreservCyt medium: easyMAG NucliSens (BioMérieux)
 Biopt: Qiagen DNA Mini Kit
Vervolgens wordt een deel van het HPV L1 gen geamplificeerd via PCR met gebiotinileerde primers
(Inno-LiPA HPV genotyping amplification kit).
Voor de uiteindelijke genotypering wordt een LiPA-strip samen met het specifieke gebiotinileerde PCRproduct in een well van een Autoblot 3000H tray gebracht. Het gebiotinileerde DNA materiaal wordt via
‘omgekeerde hybridisatie’ gebonden aan de - in parallelle lijnen op de strip - geïmmobiliseerde
oligonucleotide probes. Gebonden PCR-product wordt gedetecteerd via een ELISA, zodat op het einde
van de test een blauwe neerslag ontstaat op de plaats waar PCR-product gebonden is. Het specifieke
patroon van gekleurde lijnen op de LiPA strip dient vergeleken met de patronen voor de verschillende
HPV genotypes
In één LiPA run kunnen 1-20 stalen geanalyseerd worden in een tijdsduur van 3.5 uur.
Opmerking: Er moet altijd voorafgaand aan de LiPA een DNA-extractie en een amplificatie uitgevoerd
worden om het specifieke gebiotinileerde PCR-product te bekomen. Deze 2 voorbereidende stappen
worden op dag 1 van analyse uitgevoerd. De LiPA wordt op dag 2 uitgevoerd.
INTERPRETATIE RESULTAAT
Na aflezen van de teststrip kunnen de aanwezige HPV genotypes worden weerhouden.
De ‘Inno-LiPA HPV Genotyping Extra II kit’ omvat 13 hoog-risico (HR) HPV-types, 9 laag-risico (LR) HPVtypes, 6 mogelijks hoog-risico (pHR) HPV-types en 4 andere types.
 HR: HPV-16 / HPV-18 / HPV-31 / HPV-33 / HPV-35 / HPV-39 / HPV-45 / HPV-51 / HPV-52 /
HPV-56 / HPV-58 / HPV-59 / HPV-68
 LR: HPV-6 / HPV-11 / HPV-40 / HPV-42 / HPV-43 / HPV-44 / HPV-54 / HPV-61 / HPV-81
 pHR: HPV-26 / HPV-53 / HPV-66 / HPV-70 / HPV-73 / HPV-82
 andere: HPV-62 / HPV-67 / HPV-83 / HPV-89
Voor de cervixcytologische stalen worden alle bovenstaande 32 HPV types gerapporteerd met telkens de
vermelding negatief of positief
Voor de biopt-stalen worden enkel de positieve HPV genotypes gerapporteerd.
De Inno-LiPA strip bevat ook 2 HPV-controle lijnen waarvan minstens één van de 2 positief moet zijn voor
een HPV DNA positief staal.
Indien één of beide HPV-controle lijnen positief is maar geen enkel type-specifieke lijn, dan bevat het staal
een HPV-type dat niet voorkomt op de strip. Op het rapport verschijnt dan: “niet typeerbaar; de aanwezige
HPV genotypes kunnen niet getypeerd worden in de gebruikte analyse”
CEMOL/LabA
Toepassingsdatum zie metadata MuzliDoc
2/3
ACTIVITEITENCENTRUM
MOLECULAIRE DIAGNOSTIEK
LABA-AL041-AN56
M01
REFERENTIES



“Comparison of the Abbott RealTime High Risk HPV test and Inno-LiPA HPV genotyping Extra
test for the detection of human papillomaviruses in formalin-fixed, paraffin-embedded cervical
cancer specimens” Bostjan J. et al; JVM 175 (2011) 117-119
“Comparison of Inno-LiPA Genotyping Extra and Hybrid Capture 2 assays for detection of
carcinogenic human papillomavirus types” Barzon L. et al.; JCV 55 (2012) 256-261
“Comparison of HPV sign Genotyping Test with Inno-LiPA HPV genotyping extra assay on
histologic and cytologic cervical specimens” Barbieri D et al.; DMID 74 (2012) 43-48
CEMOL/LabA
Toepassingsdatum zie metadata MuzliDoc
3/3