hiv-1 kwalitatieve pcr

ACTIVITEITENCENTRUM
MOLECULAIRE DIAGNOSTIEK
LABA-AL041-AN49
M04
HIV-1 KWALITATIEVE PCR
INHOUD







Indicaties
Kostprijs en terugbetalingsmodaliteiten.
Uitvoerfrequentie.
Kwaliteitscontrole
Beproevingsmethode
Interpretatie resultaat
Referenties
INDICATIES

De voornaamste indicatie voor de uitvoering van een HIV-1 kwalitatieve PCR is de diagnose van de
infectie bij kinderen jonger dan 18 maand bij wie door de moeder overgedragen antilichamen de
interpretatie van de serologische tests bemoeilijken.
 Kinderen gevolgd vanaf de geboorte:
o bij geboorte (binnen de 2 dagen, geen navelstrengbloed)
o op de leeftijd van 1-2 maanden (2-4 weken na stop antiretrovirale profylaxis)
o op de leeftijd van 4-6 maanden
o op de leeftijd van 6 maanden (in geval van tri-therapie)
o op de leeftijd van 7-18 maanden indien de 2 testen na stop profylaxis niet werden
uitgevoerd
o Vanaf 18 maand: serologie.
 Kinderen NIET gevolgd vanaf de geboorte:
o bij de eerste raadpleging
o 4-6 weken na stop borstvoeding
o 3 maanden na stop borstvoeding
o 6 maanden na stop borstvoeding
o Vanaf 18 maand: serologie.
Dit schema wordt slechts toegepast voor kinderen van een moeder met een bevestigde HIVinfectie; nochtans in uitzonderlijke omstandigheden (bijvoorbeeld als de moeder niet kan getest
worden) moet de serostatus van het kind bepaald worden vooraleer dit schema toe te passen.
Vermeld op de aanvraag altijd of het om HIV-1 en/of HIV-2 detectie gaat. (HIV-2 wordt door ons
niet uitgevoerd, maar wordt doorgestuurd)
Gelieve ook de volgende informatie op de aanvraag te vermelden: naam en dossiernummer van de
moeder, antivirale medicatie (inclusief datum begin en einde behandeling)

Bij seronegatieve patiënten blootgesteld aan HIV en dus mogelijk besmet, kan de bepaling van
proviraal DNA geen betrouwbare diagnose opleveren; deze test moet dus afgeraden worden voor
deze indicatie
CEMOL/LabA
Toepassingsdatum zie metadata MuzliDoc
1/4
ACTIVITEITENCENTRUM
MOLECULAIRE DIAGNOSTIEK
LABA-AL041-AN49
M04
KOSTPRIJS EN TERUGBETALINGSMODALITEITEN
Zie labogids:



Voorwaarden voor RIZIV terugbetaling
RIZIV Nomenclatuurnummer
‘Extra - per formulier en aanvraag’ (diagnoseregels/prijs)
UITVOERINGSFREQUENTIE
Zie labogids: items ‘uitvoerfrequentie’ en ‘antwoordtijd’
KWALITEITSCONTROLE

Test niet onder accreditatie
Voor de gebruikte commerciële CE-IVD analyses wordt op regelmatige tijdstippen een positieve
kwaliteitscontrole getest.
De ‘Xpert HIV-1 Qual’ test is een commerciële CE/IVD gelabelde test die uitgevoerd wordt in
afzonderlijke ‘cassettes’ in afzonderlijke modules van het GeneXpert toestel.
Deze ‘cassettes’ bevatten meerdere ingebouwde controlemechanismes om de juiste werking van de
cassette en de geschiktheid van het staal te verifiëren.
Daarnaast bepalen wij een eigen positieve eerstelijnscontrole:
- minstens één maal per maand (alternerend op de beschikbare modules)
- bij elke lotwissel van cassettes (alternerend op de beschikbare modules)
- bij elke software aanpassing (alternerend op de beschikbare modules)
- na vervangen / calibratie / transport van een module: controle op elke module
Voor de ‘Aptima HIV-1 Quant Dx’ wordt bij iedere batch-analyse een kit-kalibrator in drievoud bepaald,
samen met een negatieve, zwak positieve en positieve kitcontrole. Daarnaast bepalen we bij elke batchanalyse ook een eigen positieve controle om de verschillende reagens-loten te overspannen.
Elke reactie heeft een interne kalibrator / interne controle (IC) die controleert op variaties in
staalverwerking, amplificatie en detectie.
Jaarlijks wordt deelgenomen aan een tweede- of derdelijns-controle (externe kwaliteitscontrole). De
resultaten van deze controles kunnen worden opgevraagd.
BEPROEVINGSMETHODE
Bij een aanvraag ‘HIV-1 PCR (kwalitatief) worden 2 verschillende analyses uitgevoerd en gerapporteerd:
‘Xpert HIV-1 Qual’ via het GeneXpert toestel op vol bloed en daarna ook de ‘Aptima HIV-1 RNA Quant
Dx’ via het Panther toestel op het afgezonderde plasma.

‘Xpert HIV-1 Qual’ (Cepheid) (CE-IVD)
De ‘Xpert HIV-1 Qual’ analyse (Cepheid) is een kwalitatieve in-vitro nucleïnezuuramplificatietest
voor de detectie van HIV-1 DNA / RNA op het volledig geautomatiseerde GeneXpert systeem
(Cepheid).
De analyse wordt uitgevoerd op 100 µl vol bloed (EDTA-tube)
DNA/RNA-extractie van het staal gevolgd real-time one-step RT-PCR.
Volledig geautomatiseerd via de ‘Xpert HIV-1 Qual’ cassettes op het GeneXpert toestel waarbij
één cassette verbruikt wordt per staal.
CEMOL/LabA
Toepassingsdatum zie metadata MuzliDoc
2/4
ACTIVITEITENCENTRUM
MOLECULAIRE DIAGNOSTIEK
LABA-AL041-AN49

M04
‘Aptima HIV-1 Quant Dx’ (Hologic) (CE-IVD)
De ‘Aptima HIV-1 Quant Dx’ analyse wordt uitgevoerd op 500 µl afgezonderd EDTA-plasma
op het Panther toestel (Hologic) in 3 opeenvolgende stappen
- ‘target capture’: selectieve extractie via ‘capture-ologonucleotiden’ die hybridiseren met
uiterst geconserveerde gebieden van het ‘target’ genoom
- targetamplificatie door transcriptiegemedieerde amplificatie (transcription mediated
amplification, TMA)
- aantonen van de amplificatieproducten (amplicon) door fluorescent gelabelde probes
De ‘Aptima HIV-1 Quant Dx’ analyse werkt via een amplificatie in 2 verschillende HIV-1 genen:
‘pol’ en ‘LTR’
INTERPRETATIE RESULTAAT

‘Xpert HIV-1 Qual’ (Cepheid) (CE-IVD)
De analyse detecteert HIV-1 proviraal DNA en HIV-1 RNA met een LOD van 278 copies/ml.
Kwalitatief resultaat:
o
o
o

Negatief: geen HIV-1 DNA/RNA gedetecteerd
Positief: HIV-1 DNA/RNA gedetecteerd
‘Onbeslist door inhibitie van de reactie, indien opportuun graag nieuw staal’.
‘Aptima HIV-1 Quant Dx’ (Hologic) (CE-IVD)
o
o
o
o
o
CEMOL/LabA
Negatief: geen HIV-1 RNA gedetecteerd. (LOD 12 HIV-1 copies/ml (1.08 log
copies/ml))
Laag positief: HIV-1 RNA gedetecteerd, doch < 30 HIV-1 copies/ml (< 1.47 log HIV-1
copies/ml)
Positief: Positief, HIV-1 RNA gedetecteerd: xxxx HIV-1 copies/ml - y.yy log HIV-1
copies/ml.
Sterk positief: Sterk positief, > 10.000.000 HIV-1 copies/ml ( > 7.00 log HIV-1 log
copies/ml)
Bij inhibitie: (IC voldoet niet aan de kwaliteits-kriteria):‘Onbeslist door inhibitie van de
Toepassingsdatum zie metadata MuzliDoc
3/4
ACTIVITEITENCENTRUM
MOLECULAIRE DIAGNOSTIEK
LABA-AL041-AN49
M04
reactie, indien opportuun graag nieuw staal’.
Bij voldoende staal werd reeds een tweede bepaling uitgevoerd (hertest) met hetzelfde
ongeldige resultaat.
REFERENTIES

Website ARL: http://www.iph.fgov.be/epidemio/epien/aidsen/arlen/nindex.html

http://www.cepheid.com/en/cepheid-solutions-uk/clinical-ivd-tests/healthcare-associatedinfections/
Artikel: “Diagnostic Accuracy of the Point-of-Care Xpert HIV-1 viral load assay in a South African
HIV Clinic”; Garrett N.J. et al; J. Acquir. Immune Defic Syndr, June 2016, Vol 72, No. 2.
Artikel: “Comparison of the Cepheid GeneXpert and Abbott m2000 HIV-1 real time molecular
assays for monitoring HIV-1 viral load and detecting HIV-1 infection”; Ceffa S. et al; J. Virol.
Methods, Dec 2016, Vol229, p.35-39.
Artikel: “Evaluation of the Xpert HIV-1 Qual assay for resolution of HIV-1 infection in samples
with negative or indeterminate Geenius HIV-1/2 results”; Michaeli M. et al; J. Clin. Virology, Jan
2016, Vol76, p.1-3.







Hopkins et al. “Comparative performance of the new Aptima HIV-1 Quant Dx assay with three
commercial PCR-based HIV-1 RNA quantitation assays” J.Clin.Virology (2015) 69: 56-62
Mor et al. “Evaluation of the Realtime HIV-1, Xpert HIV-1, and Aptima HIV-1 Quant Dx assays in
comparison to the NucliSens EasyQ HIV-1 v2.0 assay for Quantification of HIV-1viral load” J.
Clin. Microbiology (2015) 53: 3458-3465
Amendola et al. “Evaluation of the Aptima HIV-1 Quant Dx assay for HIV-1 RNA viral load
detection and quantitation in plasma of HIV-1 infected individuals. A comparison with Abbott
Realtime HIV-1 assay”. J. Med. Virology (2016) 88: 1535-1544.
Manak et al. “Evaluation of Hologic Aptima HIV-1 quant dx assay on the Panther system on HIV
subtypes” J. Clin. Microbiology (2016) 54: 2575-2581
CEMOL/LabA
Toepassingsdatum zie metadata MuzliDoc
4/4