PowerPoint-presentatie

V18-2-2016
Liquid biopsies Leuvens Kanker Instituut: flowchart staalverwerking
10 ml
EDTA tube:
automatisch
label
Buizenpost
Labo
Van Ranst:
Enkele
centrifugatie
• Plasma invriezen in 8 x
0,5ml epjes op -20°
• Buffy coat (hele
resttube) invriezen op 20°C
Individuele labo’s
halen regelmatig
stalen op
Bloedafname
(E612/E427)
10 ml
Strecktube:
automatisch
label
2x/week
opgehaald
Labo
Vermeesch:
Dubbele
centrifugatie
•
•
•
Alles invriezen -80°
DNA extractie van
buffy coat
Research projecten
Plasma Rest invriezen
in 2 ml epp op -20°
Plasma 3 ml invriezen
in 5 ml epp op -20°
• Enkele centrifugatie:
- Meng de bloedstalen door de EDTA bloedtube (10 ml) verschillende malen om te
keren (niet vortexen of schudden!).
- Centrifugeer de bloedstalen gedurende 10 min op 1900xg bij 4°C (centrifugatie
moet zeker binnen het uur gebeuren).
- Breng (zonder de pellet te verstoren) 0,4-mL aliquots van het bovenstaande plasma
over naar een reeks gelabelde 0,5-mL cryovial Eppendorf tubes.
- Stockeer de aliquots zo snel mogelijk in de -20°C.
• cfDNA extractie
• cfDNA analyse
• Dubbele centrifugatie:
- Meng de bloedstalen door de STRECK bloedtube (10 ml) verschillende malen om te keren (niet
vortexen of schudden!).
- Centrifugeer de bloedstalen voor 20 minuten op 2000 x g (RCF) (equivalent: 3500 RPM).
- Breng het bloedplasma (de bovenste laag na centrifugatie) over naar de eerste reeks gelabelde 5
ml eppendorf tubes. De opbrengst is ongeveer 4,5 ml bloedplasma wanneer gestart wordt met 8 à
10 ml volledig bloed.
- Centrifugeer de eppendorf tubes met bloedplasma met behulp van de daarvoor voorziene rotor
gedurende 2 minuten op 13,000 rpm om cellen en celdebris neer te slaan in een kleine pellet.
- Breng het bloedplasma over naar twee nieuwe gelabelde 'low binding' epjes.