Moleculaire diagnostiek darmparasieten -overzicht 2015-

Moleculaire diagnostiek darmparasieten
-overzicht 2015Theo Schuurs, moleculair bioloog
Lid namens WMDI / NVMM
Rob Koelewijn
Jaap van Hellemond
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
2013: Introductie fecespanel geschikt voor Mdx
SKML-parasitologie
Voorwaarden rondzending:
- pathogeen in feces
> geen gevriesdroogd materiaal
> geen DNA
> niet gefixeerd
- hoge kwaliteit: reproduceerbare en stabiele feces-monsters
- uitdagende loads geschikt voor moleculaire diagnostiek
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
Workflow monsters moleculair panel (SKML-parasitologie)
Routine monster
afkomstig ref. lab
(t=-18d tot -9d)
Vervaardigen
rondzending
Test
ref. labs
Test
5-voud
Rondsturen
panel
Kwaliteitscontrole: Documentatie
Rondzending feces PCR
SKML 3e en 4e rondzending 2012
Nummer
Materiaal
Hoeveelheid
Aangeleverd door
Klinische gegevens
Datum bereiding
Vries dooi cyclus
Verzonden naar ref. lab
PIN
Datum 1e bevinding
Uitslag Microscopie
Uitslag PCR
CT-waarde
Uitgevoerd door:
Datum 5-plo
Uitslag 5-plo
Gem.
SD.
Uitslag PCR
Uitslag ref. lab
Gem.
SD.
CT-waarde max.
CT-waarde min.
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
Geschikt voor rondzending
Opmerking
Nummer rondzending
FMB-17
feces PBS 1:3
FMB-20
feces PBS
FMB-23
feces PBS
FMBfeces P
Izore
Izore
HZH/Erasmus
Haarle
16-7-2012
Nee
17-7-2012
26-7-2012
Nee
31-7-2012
24-10-2012
24-10-2
24-10-2012
24-10-2
10-7-2012
GL
19,1
CR
CR
onb
CR
31,7
HZH/EMC
25-jul
HZH/EMC
EH
EH
onb
HZH/EMC
HZH/E
27,6
27,7
27,9
27,4
28,2
33,6
34,0
34,5
34,1
34,6
34,6
34,0
35,6
34,4
34,1
36,7
37,3
37,3
36,9
36,4
27,8
0,30
34,2
0,40
34,5
0,64
36,9
0,39
CR
31,8
2,4
34,2
28,5
CR
28,6
5,01
34,5
20,2
EH
33,2
3,07
37,0
28,4
GL
GL
24,9
2,48
27,8
21,1
ja
ja
ja
2012-3F
2012-3E
2012.4.E
ja
2012.4
Stabiliteit monsters (na 14 dagen kamertemp.)
3,0
2,0
Δ Cq
1,0
2013.2A Cryptosporidium spp.
2013.2A D. fragilis
0,0
t=0
-1,0
-2,0
-3,0
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
t=1
t=2
2013.2B G. lamblia
Overzicht 2015
parasiet
n (correct)
n (totaal)
Cq
opmerkingen
(1x FN)
(1x verwisseling)
2015.1A
2015.1B
2015.1C
D. fragilis
G. lamblia
Crypto spp.
28
31
31
28
32
32
31
29
31
2015.2A
2015.2C
2015.2D
D. fragilis
E. dispar
E. histolytica
E. dispar
G. lamblia
G. lamblia (DNA!)
24
5
30
5
31
30
26
6
31
6
31
31
34
32
32
32
28
26
(1x FN)
2015.3A
2013.3B
2013.3C
D. fragilis
Crypto spp.
G. lamblia
27
30
30
27
31
31
30
30
28
(1x FP: G.lamblia)
(1x FN)
(1x FN)
2015.2B
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
(2x FN)
(1x FN)
(1x FN)
(1x FN)
Rondzendingen 2013-2015
2013 8 samples
2014 8 samples
2015 9 samples
Giardia lamblia
Entamoeba histolytica
Cryptosporidium spp.
Dientamoeba fragilis
Entamoeba dispar
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
(4 rounds, 2 samples each)
(4 rounds, 2 samples each)
(3 rounds, 3 samples each)
10x
4x
6x
11x
3x
Sensitiviteit 2013-2015
G.lamblia
N
Crypto spp.
N
E.histolytica
N
D.fragilis
N
2013
99
85
92
38
77
26
nd
-
2014
96
84
100
54
83
52
98
48
2015
98
85
96
57
97
29
100
73
N = number of reported results (participants * samples)
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
Fout-negatieven 2013-2015
relatieve load
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
Cq waarden G.lamblia per laboratorium, 2013-2015
Participant number
Cq waarden G.lamblia per laboratorium, 2013-2015
False result (true)
False result (administrative)
Participant number
Cq waarden E.histolytica per laboratorium, 2013-2015
Participant number
Cq waarden E.histolytica per laboratorium, 2013-2015
False result (true)
False result (educational sample)
False result (administrative)
Participant number
Werkwijze moleculaire diagnostiek intestinale parasieten
voorbehandeling
feces
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
DNA
isolatie
target
amplificatie
G. lamblia uitslagen feces en gezuiverd DNA
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
G.lamblia uitslagen feces en gezuiverd DNA
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
G.lamblia uitslagen feces en gezuiverd DNA
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
G.lamblia uitslagen feces en gezuiverd DNA
PCR?
pretreatment/
DNA-isolation?
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
G.lamblia uitslagen feces en gezuiverd DNA
Difference reported Cq value to median all participants
15
10
Giardia lamblia
Cryptosporidium spp
Entamoeba histolytica
5
0
-5
-10
32
3
29 9
7
34 7
31
12
65
7
32 7
82
11
31 6
21
36
31 3
3
32 1
6
11 1
0
16 1
8
30 8
40
12
31 9
99
48
31 9
6
32 4
6
36 3
1
32 7
7
36 9
22
22
5
85
31
9
11 7
48
62
40
32 0
5
32 3
8
29 0
3
11 8
8
21 4
7
30 1
97
-15
Participant number
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
Samenvattend moleculaire rondzendingen SKML-parasitologie
Huidig:
- rondzending van stabiele en reproduceerbare monsters
- enorme variatie in gerapporteerde Cq waarden
- laboratoria met lage Cq waarden rapporteren minder fout-negatieven
- matige labscores zijn individueel terug te voeren op verminderd
sensitieve PCR en/of DNA isolatie (incl. voorbehandeling)
Toekomst:
- gezuiverd DNA rondsturen (voor alle pathogenen)
- koppeling aan methodiek
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
overzicht Trichomonas vaginalis 2015
parasiet
n (correct)
n (totaal)
Cq
opmerkingen
(1x FN)
(1x FN)
2015.1A
2015.1B
2015.1C
negatief
T. vaginalis
T. vaginalis.
26
25
25
26
26
26
36 (33-41)
36 (33-40)
2015.2A
2015.2B
2015.2C
T. vaginalis
negatief
T. vaginalis
28
27
28
28
28
28
26 (21-32)
30 (26-34)
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
(1x FP)
overzicht Trichomonas vaginalis 2015
parasiet
n (correct)
n (totaal)
Cq
opmerkingen
(1x FN)
(1x FN)
2015.1A
2015.1B
2015.1C
negatief
T. vaginalis
T. vaginalis.
26
25
25
26
26
26
36 (33-41)
36 (33-40)
2015.2A
2015.2B
2015.2C
T. vaginalis
negatief
T. vaginalis
28
27
28
28
28
28
26 (21-32)
30 (26-34)
Conclusies: - goede scores
- enorme spreiding Cq waarden
Stichting Kwaliteitsbewaking
Medische Laboratoriumdiagnostiek
Sectie Parasitologie
(1x FP)