Optimalisatie van enzymatische testen voor de analyse

Optimalisatie van enzymatische
testen voor de analyse van
sulfiet, L-ascorbinezuur en
glucose in voedsel
Kürt Bultinck
Biotox, Jabbeke
Overzicht



Principe
Analyses
Bepalingen
• Sulfiet
• L-ascorbinezuur of vitamine C
• Glucose


Resultaten
Conclusies
Principe
Opstellen van een validatiedossier gebeurt aan de hand van:




Reproduceerbaarheid
Herhaalbaarheid
Juistheid van de controle
Juistheid van het spiken
Analyses
3 bepalingen met 3 verschillende matrices:
• Sulfiet (rotsjes, sinaasappelsap en koekjes)
• L-ascorbinezuur of vitamine C (pannenkoeken, sinaasappelsap en poeder afkomstig van vitamine Csupplementen.
• Glucose (pannenkoeken, sinaasappelsap en confituur)
Bepalingen
Sulfiet
Pipetteer in een cuvet
Blanco (mL)
Staal (mL)
Reactiemengsel 2*
1,000
1,000
Staal
-
0,100
Demiwater
2,000
1,900
Oplossing 3
0,010
0,010
Meng en lees de absorbanties af na ongeveer 5 minuten. Start de reactie na
toevoeging van:
Oplossing 4
0,050
Meng en lees de absorbantie af na 30 minuten.
0,050
Bepalingen
Vitamine C
Pipetteer in een cuvet
Blanco (mL)
Staal (mL)
Oplossing 1 (37°C)
1,000
1,000
Staal
0,100
0,100
Demiwater
1,500
1,500
Spatel met
ascorbaatoxidase
één spatel
-
Meng en incubeer gedurende 6 minuten bij 37°C. Roer om de 2 minuten 5
seconden met de spatel. Lees de absorbanties af en start de reactie door
toevoegen van:
Oplossing 3
0,100
0,100
Meng en plaats de cuvetten bij 37°C. Lees de absorbantie af na 15 minuten.
Bepalingen
Glucose
Pipetteer in een cuvet
Blanco (mL)
Staal (mL)
Oplossing 1
1,000
1,000
Staal
-
0,100
Demiwater
2,000
1,900
Meng en lees de absorbantie af na 3 minuten (A1). Start de reactie na
toevoeging van:
Oplossing 2
0,020
Meng en lees de absorbantie af na 15 minuten.
0,020
Resultaten
Reproduceerbaarheid
Sulfiet
Rotsjes (mg/kg) Sinaasappelsap (g/L) Koekjes (mg/kg)
Gemiddelde
45
0,0147
50,78
Standaarddeviatie
7,11
0,0021
7,14
% variatiecoëfficiënt
15,79
14,22
14,06
Vitamine C
Pannenkoeken (mg/kg) Sinaasappelsap (g/L) Poeder (mg/kg)
Gemiddelde
2704,3
0,1172
28630,9
Standaarddeviatie
275,9
0,0159
1160,8
% variatiecoëfficiënt
10,20
13,55
4,05
Resultaten
Reproduceerbaarheid
Glucose
Pannenkoeken
Sinaasappelsap (g/L)
(mg/kg)
confituur
(mg/kg)
Gemiddelde
13727,83
2,36
234408,3
Standaarddeviatie
5282,68
0,03
6855,02
% variatiecoëfficiënt
38,48
1,15
2,92
Resultaten
Herhaalbaarheid
Sulfiet
Rotsjes (mg/kg) Sinaasappelsap (g/L) Koekjes (mg/kg)
Gemiddelde
41,8333
0,0133
61,5
Standaarddeviatie
7,17
0,0017
4,416
% variatiecoëfficiënt
17,13
13,19
7,18
Vitamine C
Pannenkoeken (mg/kg) Sinaasappelsap (g/L) Poeder (mg/kg)
Gemiddelde
2416,8
0,09
29801,3
Standaarddeviatie
338,77
0,01
1400,7
% variatiecoëfficiënt
14,02
6,11
4,70
Resultaten
Herhaalbaarheid
Glucose
Pannenkoeken
Sinaasappelsap (g/L)
(mg/kg)
Confituur
(mg/kg)
Gemiddelde
13727,83
2,36
234408,3
Standaarddeviatie
5282,68
0,03
6855,02
% variatiecoëfficiënt
38,48
1,15
2,92
Resultaten
Juistheid controle
Sulfiet
Theoretisch
sulfietgehalte
Gemeten
sulfietgehalte
% terugvinding
Meting 1.1
0,3
0,297
99,00
Meting 1.2
0,3
0,298
99,33
Meting 1.3
0,3
0,303
101,00
Meting 1.4
0,3
0,298
99,33
Meting 1.5
0,3
0,297
99,00
Meting 1.6
0,3
0,294
98,00
Gemiddelde
99,28
Resultaten
Juistheid controle
Vitamine C
Theoretisch
vitamine Cgehalte
Gemeten
vitamine Cgehalte
% terugvinding
Meting 1.1
0,2
0,1581
79,05
Meting 1.2
0,2
0,1632
81,60
Meting 1.3
0,2
0,1604
80,20
Meting 1.4
0,2
0,1581
79,05
Meting 1.5
0,2
0,1595
79,75
Meting 1.6
0,2
0,1624
81,20
Gemiddelde
80,14
Resultaten
Juistheid controle
Glucose
Theoretisch
Gemeten
glucosegehalte glucosegehalte
% terugvinding
Meting 1.1
0,5
0,4949
98,98
Meting 1.2
0,5
0,4949
98,98
Meting 1.3
0,5
0,4931
98,62
Meting 1.4
0,5
0,4957
99,14
Meting 1.5
0,5
0,5009
100,18
Meting 1.6
0,5
0,4923
98,46
Gemiddelde
99,06
Resultaten
Sulfiet
Terugvinding spiken
Vitamine C
% terugvinding
% terugvinding
Rotsjes 1
114,03
Poeder 1
87,30
Rotsjes 2
101,50
Poeder 2
81,97
Gemiddelde
107,77
Gemiddelde
84,64
Standaarddeviatie
8,86
Standaarddeviatie
3,77
Koekjes 1
91,87
Koekjes 2
103,86
Gemiddelde
97,87
Standaarddeviatie
8,48
Resultaten
Terugvinding spiken
Glucose
% terugvinding
Confituur 1
14,69
Confituur 2
17,82
Gemiddelde
16,26
Standaarddeviatie
2,22
Conclusies
Sulfiet
• Reproduceerbaarheid: Te hoog, niet ok.
• Herhaalbaarheid: Te hoog, niet ok.
• Juistheid controle: Ok.
• Terugvinding spiken: Ok.
Vitamine C
• Reproduceerbaarheid: Te hoog, niet ok.
• Herhaalbaarheid: Te hoog, niet ok, behalve poeder.
• Juistheid controle: Te laag, niet ok.
• Terugvinding spiken: Te laag, niet ok.
Conclusies
Glucose
• Reproduceerbaarheid: Te hoog, niet ok.
• Herhaalbaarheid: Enkel sinaasappelsap ligt te hoog,
voor sinaasappelsap en confituur is het ok.
• Juistheid controle: Ok.
• Terugvinding spiken: Te laag, niet ok.
• Externe bepaling: 1,45%  hier 1,40%  Ok.
Optimalisatie van enzymatische
testen voor de analyse van
sulfiet, L-ascorbinezuur en
glucose in voedsel
Kürt Bultinck
Biotox, Jabbeke